Цветная реакция на гемоглобин
К гемпротеидам относят гемоглобин, миоглобин, цитохромы и ферменты – каталазу и пероксидазу. Они состоят из белковой части и гема, представляющего собой тетрапиррольное соединение, связанное с атомом железа (II).
При действии на гемоглобин концентрированной уксусной кислоты в присутствии NaCl гем переходит в гемин, в котором железо трехвалентно и его третья валентность связана с хлором. При действии на гемоглобин щелочей гем переходит в гематин, в котором атом железа также трехвалентен, и третья его валентность связана с гидроксильной группой.
Гем, входящий в гемоглобин, ускоряет реакцию окисления субстратов (S·H2) пероксидом водорода, т.е. действует подобно ферменту пероксидазе: S·H2 + H2O2 – S + 2H2O. Это объясняется сходством строения простетических групп гемоглобина и пероксидазы. Однако в отличие от фермента гемоглобин сохраняет каталитические свойства при кипячении и действии сильных кислот, которые вызывают денатурацию белка.
Если в исследуемом материале содержится кровь, то ее присутствие можно обнаружить по способности геминовой группы катализировать окисление подходящих субстратов (бензидин, гвояковая смола) пероксидом водорода.
Реактивы. Пероксид водорода, 3%-ный свежеприготовленный раствор; бензидин, 5%-ный свежеприготовленный раствор в ледяной уксусной кислоте; гваяковая смоляная кислота, 1%-ный раствор на 95%-ном этиловом спирте, свежеприготовленный; азотная кислота, конц.; соляная кислота, не содержащая железа, 10%-ный раствор; гексацианоферрат (II) калия, 2,5%-ный раствор; роданид аммония, 1%-ный раствор; гидроксид натрия, 3%-ный раствор; биуретовый реактив*; ацетон, подкисленный соляной кислотой (3 мл 2 М раствора HCl на 1 л ацетона, рН≈2), охлажденный в холодильнике.
Оборудование. Полоски фильтровальной бумаги шириной 1 см; глазные пипетки; пипетки вместимостью 1 и 10 мл; штатив; простые и центрифужные пробирки; водяная и песчаная бани; центрифуга с центрифужными весами; тигель фарфоровый и тигельные щипцы.
Материал.
1. Цельная кровь, разведенная в 5000 раз дистиллированной водой.
2. Кровь дефибринированная.
3. Гемоглобин кристаллический, 1%-ный водный раствор.
а. Бензидиновая проба на геминовую группу гемоглобина. Метод основан на способности геминовой группы гемоглобина катализировать реакцию окисления бензидина в дифенохинондиимин пероксидом водорода
Дифенохинондиимин конденсируется с молекулой неокисленного бензидина с образованием окрашенного комплекса сине-зеленого цвета.
В пробирку наливают 1 мл цельной крови, разведенной в 5000 раз, кипятят несколько минут на водяной бане, охлаждают и добавляют по 2 капли раствора бензидина и пероксида водорода. Отмечают появление окрашивания.
б. Гваяковая проба на геминовую группу гемоглобина. Метод основан на способности геминовой группы гемоглобина катализировать реакцию окисления гваяковой смоляной кислоты пероксидом водорода до ее озонида, окрашенного в синий цвет.
Ход определения. В пробирку вносят несколько капель цельной крови (разведенной в 5000 раз) и кипятят ее в течение 1 мин на водяной бане. После охлаждения приливают к пробе 1-2 капли спиртового раствора гваяковой смоляной кислоты и 3 капли раствора пероксида водорода. Отмечают развитие окрашивания.
в. Проба с гексацианоферратом (II) калия и роданидом аммония на железо гемоглобина. Метод основан на способности железа, входящего в гемоглобин, образовывать с гексацианоферратом (II) калия в присутствии соляной кислоты сине-зеленое комплексное соединение – берлинскую лазурь:
4FeCl3 + 3K4[Fe(CN)6] → Fe4[Fe(CN)6]3 + 12KCl ,
гексацианоферрат (II) берлинская
калия лазурь
а с роданидами – роданид железа розового или красного цвета:
FeCl3 + 3NH4CNS → Fe(CNS)3 + 3KCl
роданид роданид
аммония железа
Ход определения. Несколько капель дефибринированной крови помещают в фарфоровую чашечку (тигель) и выпаривают досуха на песчаной бане. Сухой остаток озоляют, добавляют 2-3 капли концентрированной азотной кислоты и продолжают нагревание (под тягой). При этом железо гемоглобина переходит в состав золы.
Сухой остаток переносят в пробирку, добавляют 10 капель раствора соляной кислоты до растворения золы. Разливают содержимое примерно поровну в две пробирки. В одну из них добавляют 2 капли раствора гексацианоферрата (II) калия. Наблюдают за появлением характерного окрашивания. Во вторую пробирку приливают 2 капли раствора роданида аммония и отмечают развитие специфического окрашивания.
г. Разделение гемоглобина на гем и глобин. Метод основан на способности ацетона, подкисленного соляной кислотой, разрывать связи между гемом и глобином, причем отщепившийся гем растворяется в ацетоне, а глобин выпадает в осадок.
Ход определения. В пробирку наливают 10 мл подкисленного ацетона и медленно добавляют 10 капель раствора гемоглобина. Наблюдают появление беловатой взвеси (глобин), которая постепенно оседает. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой, переливают в центрифужные пробирки и центрифугирую при 1500 об/мин в течение 5 мин.
После центрифугирования в верхний слой (ацетоновый) осторожно опускают две полоски фильтровальной бумаги и проделывают реакции на наличие геминовой группировки. Для этого на одну полоску наносят по капле бензидина и раствора пероксида водорода (бензидиновая проба), на вторую –по две капли спиртового раствора гваяковой смоляной кислоты и раствора пероксида водорода (гваяковая проба). Отмечают постепенное появление характерного окрашивания на обеих полосках бумаги.
Верхний слой жидкости осторожно сливают, а к оставшемуся осадку добавляют 1 мл 3%-ного раствора гидроксида натрия. Перемешивают содержимое и добавляют 10 капель биуретового реактива. Наблюдают появление характерного окрашивания.
Оформление работы. Результаты оформить в виде таблицы.
Компонент гемоглобина | Вид реакции | Характер окрашивания |
В выводах указать на возможность обнаружения гемоглобина в исследуемом материале с помощью проделанных качественных реакций и разделения его компонентов действием кислых растворов ацетона; отметить значение реакций для практики.
Практическое значение работы. Основная часть гемпротеидов крови находится в виде гемоглобина эритроцитов. В сыворотке или плазме крови содержится лишь незначительное количество гемпротеидов, появляющихся при значительном распаде эритроцитов (гемолизе). В сыворотке крови железо находится в виде ферротрансферина, являющегося сложным белком (металлопротеидом), который переносит железо между тканями и органами.
Качественные реакции на простетические группы протеидов позволяют выявить структурные компоненты: геминовую группировку и входящее в состав гема железо. Для обнаружения следов крови очень чувствительные бензидиновая и гваяковые пробы используются в клинике и судебно-медицинских исследованиях.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
Гемоглобин — входящий в состав эритроцитов крови сложный железосодержащий белок. Принимает участие в транспортировке кислорода от легких к клеткам всех органов и выведении углекислого газа в обратном направлении.
Сразу можно отметить, что высокий уровень гемоглобина говорит про повышенное свертывание крови, что не является положительным моментом. В результате увеличения вязкости крови повышается вероятность продуцирования тромбов, помимо этого транспортировка кислорода также затруднена.
Чтобы понимать, стоит ли тревожиться и насколько кардинальные меры принимать, нужно знать, какой показатель считается оптимальным для хорошего здоровья. О чем это говорит повышенный гемоглобин, и что надо делать в такой ситуации мы рассмотрим в этом материале.
Норма
Нормальными показателями уровня гемоглобина в крови для женщин являются 120-140 г/л и для мужчин — 135-160 г/л.
Показатель может колебаться в зависимости от физического и психического состояния. Длительное его понижение или повышение по сравнению с нормальными показателями свидетельствует о неблагополучии в организме.
Повышенный гемоглобин у мужчин
Может быть как следствие курения, из – за состояния организма, вызванного рядом заболеваний. При таких болезнях как эритроцитоз, пернициозная анемия и гемолитическая анемия, когда меняется состав крови.
При эритроцитозе повышается количество эритроцитов, что может быть вызвано заболеванием почек, легких, сердца. Причинам, которые повышают гемоглобин, могут быть поставленные искусственные клапаны в сердце, желчнокаменная болезнь. Нехватка фолиевой кислоты, витамина В12 из – за заболеваний слизистой желудка, который неспособен всасывать эти необходимые элементы, тоже могут способствовать повышению гемоглобина у мужчин.
Повышенный гемоглобин у женщин
О чем это говорит, и что надо делать? У женщин повышенный гемоглобин наблюдается довольно редко. Как уже говорилось выше, норма у здоровых женщин варьируется между 120 и 140 г/л.
Допускается, чтобы гемоглобин был повышен в пределах 10-20 единиц, если показатели выше 20, следует обследоваться. Причинами могут быть заболевания крови, врожденные дефекты сердца, онкологические заболевания и сердечно-легочная недостаточность.
О чем говорит высокий уровень гемоглобина
Рассматриваемый компонент крови содержится в эритроцитах, вырабатываемых костным мозгом. Эти красные кровяные тельца выполняют функцию переноса кислорода к различным органам.
Поэтому, если повышается гемоглобин, скорее всего, в какой-то области организма имеет место гипоксия (кислородное голодание). Из-за нее костный мозг вырабатывает слишком много эритроцитов, а вязкость крови увеличивается.
Причины высокого гемоглобина
Почему гемоглобин повышен, и что это значит? Изменения такого важного показателя, как уровень гемоглобина, говорит о том, что произошла дисфункция определенных органов и систем. Хотя в некоторых случаях высокий гемоглобин является нормой – например, у людей, проживающих в горной местности. Это компенсаторная реакция организма на недостаток кислорода высоко в горах.
Основными причинами повышения гемоглобина в крови у взрослого человека, в т. ч. и у женщин, являются:
- Не слишком тревожным, хотя и негативным признаком, является повышение гемоглобина у курильщиков (а также людей, недавно побывавших в пожаре). Дело в том, что гемоглобин способен переносить только кислород или углекислый газ, легко замещая их друг другом.
- Сильное обезвоживание повышает уровень плазмы, и как результат увеличивается объем циркулирующей крови. Сам процесс обезвоживания не увеличивает уровень содержания красных кровяных телец, однако, последствия выраженные в увеличении объема крови повышают их концентрацию в целом, что так же выражается в повышенном уровне гемоглобина.
- Приобретенные пороки сердца, характеризующиеся высоким давлением в легочном круге кровообращения. В наибольшей степени это характерно для митрального стеноза ревматической этиологии.
- Врожденные болезни сердца, особенно пороки, которые сопровождаются обогащением легочного кровотока. В данном случае окраска кожи изменяется с раннего детства и носит синюшный оттенок. Ребенка достаточно часто беспокоит одышка, может возникать кашель. Проведение УЗИ сердца позволяет поставить правильный диагноз. Лечение таких заболеваний при выраженной клинике только оперативное.
- Увеличение количества эритроцитов в крови (эритроцитоз).
- Повышение количества гемоглобина в кровяной плазме (гемоглобинемия).
- Нарушенная проходимость кишечника.
- Болезни легких и легочная недостаточность.
- Переизбыток в организме человека витаминов В6 и В12.
- Онкологические заболевания.
Тем не менее, повышенное содержание гемоглобина в крови может быть связано не только с различного рода заболеваниями, а также со средой проживания и образом жизни.
Физиологические причины
Рассмотрим основные причины повышения гемоглобина, которые имеют внешнее происхождение:
- Проживание на больших высотах. Чем больше высота, тем ниже уровень кислорода в воздухе. Из-за этого организм производит как можно больше гемоглобина, чтобы связывать максимальное количество кислорода.
- Регулярное нахождение на свежем воздухе и занятия спортом повышают уровень гемоглобина.
- У женщин внешним фактором, который влияет на увеличение гемоглобина можно считать беременность.
- Особенности профессии. Речь о том, что иногда работа проходит в условиях низкого содержания кислорода, и на такое состояние организм реагирует поднятием уровня гемоглобина в крови
- Применение анаболических стероидов.
Высокий гемоглобин – это менее опасное явление, чем если уровень понижен, так как при низких показателях этого вещества ставится диагноз анемия. Однако стоит отметить, что повышенный гемоглобин все же является поводом для обращения за медицинской помощью, так как может свидетельствовать о наличии серьезной патологии в организме.
Было подмечено, что гемоглобин выше нормы повышает риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, а также нередко приводит к развитию инсультов и инфарктов.
Симптомы и последствия высокого гемоглобина
При высоком гемоглобине, симптомов человек может не испытывать никаких, но при длительном и значительном изменении этого показателя с комплексом сопутствующих заболеваний, у пациента могут быть различные расплывчатые симптомы, которые носят общий характер и не указывают на конкретное заболевание:
- повышенная утомляемость, вялость;
- слабый аппетит;
- сонливость или наоборот проблемы с засыпанием;
- боли в суставах, костях – в ребрах, бедрах;
- повышается артериальное давление;
- головные боли, головокружение;
- зуд кожи, особенно после душа, ванны;
- боли в животе.
- быстрое образование синяков и легкое возникновение кровотечений.
Эти признаки проявляются на внешнем уровне. Но самые опасные процессы происходят внутри организма. Наблюдается загустение кровяной среды, повышение ее вязкости и снижение скорости циркуляции в организме. Из-за этого внутренние органы не получают питания. Самое серьезное последствие – формирование тромбов и бляшек, вызывающих инфаркты и инсульты.
Как понизить гемоглобин в крови
Если то, от чего повышается гемоглобин, не связано с серьезными патологиями, то можно воздействовать на высокий гемоглобин определенным питанием или лекарственными средствами. Среди аптечных препаратов, находящихся в относительно свободном доступе, можно выделить те, которые направлены на разжижение крови: Курантил, Кардиомагнил, Трентал или же заурядный Аспирин. Назначает их только специалист.
Чтобы в домашних условиях снизить уровень гемоглобина необходимо строже подойти к своему рациону и пересмотреть питание:
- Повышение уровня жидкости в организме. Для этого достаточно пить больше теплой жидкости. Если это невозможно (к примеру, при тяжелых обширных ожогах), то используют капельницы с физраствором.
- Рекомендуется сократить в рационе жиры, кондитерские изделия с кремом и яйца, так как они повышают холестерин и так в густой крови. Нельзя принимать поливитамины и препараты, содержащие медь и железо. Отдавайте предпочтение морепродуктам, белому мясу, бобовым, орехам и овощам.
- Следует ограничить употребление продуктов, повышающих гемоглобин. Это продукты, богатые белком и железом — мясо красных сортов, фрукты, овощи и ягоды красного цвета, субпродукты мясные, рыбную икру, сливочное масло, гречневую кашу, сладкое и копченое.
Полезно употреблять в пищу такие продукты:
- Рыба любых сортов и морепродукты (кроме мидий).
- Куриное мясо.
- Некоторые бобовые культуры.
- Свежие сырые салаты из овощей и фруктов.
- Отваренные и запеченные овощи.
Мы уже говорили о том, что повышенный гемоглобин – это только симптом какого-то заболевания. Поэтому одновременно с его нормализацией необходимо найти и устранить первичную причину.
Это начинает напоминать до боли знакомые симптомы.
Что могут сказать специалисты по высотным болезням?
В статье много специфичных терминов, хотелось бы разобраться
КОРОНАВИРУС В США СДЕЛАЛИ НЕВЕРОЯТНОЕ ОТКРЫТИЕ: COVID-19 НЕ ВЫЗЫВАЕТ ПНЕВМОНИЮ, ЭТО ВСЕ ЖЕЛЕЗО И ГЕМОГЛОБИН
Важное обновление от Dr. Hany Mahfouz: после лечения сотен пациентов в США я считаю, что COVID-19 не вызывает тяжелой вирусной пневмонии или ОРДС, как первоначально предполагалось.
Вся легочная механика не повреждена, и соблюдение легких в аппарате ИВЛ выглядит нормальным. COVID-19 является очень неприятным вирусом, вызывающим уникальный эффект, поскольку он влияет на молекулы гемоглобина в крови, и поэтому развивается тяжелая гипоксемия и полиорганная недостаточность из-за серьезного снижения пропускной способности Hb, вызванного связывание и ингибирование молекулы гем-глобина.
Вот как работают гидроксихлорохин и флавипривир, ингибируя связывание белка оболочки вируса с молекулой порфиринового кольца.
Протоколы вентиляции и ARDS могут вызывать повреждение легких, вызванное вентилятором, а не лечить состояние.
Инфильтрат в рентгенографии и компьютерной томографии вызван окислительным стрессом от скопления гем, выделенного вирусом в альвеолах, который вызывает химический пневмонит, а не вирусную пневмонию. Вирус зависит от порфирина, поэтому он более тяжелый у мужчин и быстрее растет с гликозилированным Hb, и поэтому он плох у диабетиков и пожилых пациентов. Чем выше Hb F и A2, тем лучше, так как нет цепей бета-глобина, которые можно связать, так что это не так уж плохо для детей. Гипербарический кислород и переливание крови могут временно помочь. Вирус вызывает состояние, подобное росту, метгемоглобинемии и отравлению угарным газом.
Подводя итог
COVID не вызывает пневмонию или ОРЗ. Мы лечим подозреваемую неправильную болезнь.
SARS2 – Вирус короны связывается с гемоглобином таким образом, что выделяет ион * железа * в циркуляцию
Hb теряет способность связывать кислород, поэтому кислород не поступает в основные органы. Вот почему мы видим стойкую гипоксию наряду с очень быстрой недостаточностью многих органов.
Чтобы еще больше упростить это, мы можем взять пример СО-зелья, где Hb не может переносить кислород.
Железо, выделяемое в кровообращение, настолько токсично, что вызывает сильное окислительное повреждение легких (что объясняет двусторонние – и всегда двусторонние – помутнения матового стекла, наблюдаемые на КТ грудной клетки у этих пациентов, которые были ошибочно трактуется как двусторонняя пневмония).
Тело пытается компенсировать это, повышая скорость синтеза Hb, что объясняет, почему у этих пациентов высокий уровень Hb.
Другие компенсаторные механизмы для борьбы с железной нагрузкой, такие как повышение уровня ферритина , объясняют очень высокий уровень ферритина, наблюдаемый у этих пациентов
Хлорохин, поскольку противомалярийные препараты работают для защиты Hb от инвазии малярийными паразитами … здесь он делает то же самое, но только защищая Hb от вирусной инвазии
Эта теория может объяснить, почему мы так быстро теряем пациентов и почему искусственная вентиляция легких не так эффективна при лечении, а использование протокола искусственной вентиляции легких ARDS не приносит никакой пользы. это может на самом деле быть бесполезным и вызвать больше повреждения легких
Конечно, необходимы дополнительные исследования, чтобы понять точный патогенез, потому что это единственная надежда на правильное лечение. Вы не можете иметь дело с тем, что вы действительно не знаете.
Это также может объяснить
Почему высокий ферритин является плохим прогностическим маркером (слишком много железа означает, что слишком много Hb потеряло свою способность переносить кислород)
Почему существует моноцитоз, так как организму нужны избыточные макрофаги, чтобы поглотить избыточную железную нагрузку … также, почему существует лимфопения, так как дифференцировка лейкоцитов предпочтительнее линии моноцитов линии лимфоцитов.
Почему повреждение печени с высоким уровнем ALT происходит и почему у него худший прогноз; может быть связано с прямой вирусной инфекцией гепатоцитов или перегрузкой железом.
UPD
этот пост “странным образом” ушёл с основной ленты, вместе с исчезновением отнесения к рубрике “новости”. Тот кто это сделал – считает что это – не новость? В таком случае я ему(ей) сочувствую.
ИМХО, этот материал должен быть более интересен горному сообществу, нежели шабановские разборы на тему “кто кого обскакал” в Крыму по свободе передвижения. Ах, да! Чтобы обсуждать этот его опус – надо быть экспертом. Увы, не считаю себя таковым. Означает ли это что и написанное им – более актуально для сообщества, чем медицинские вопросы, перекликающиеся с горными?
Потому – добавил рубрику “Взаимопомощь”
Надеюсь быть понятым…