Для чего делают электрофорез гемоглобина
[13-165]
Электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатий
3045 руб.
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов): 2α и 2β, каждая из которых связана с гемом. Гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Посредством электрофореза гемоглобина можно проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.
Синонимы английские
Serum Hemoglobin Electrophoresis.
Метод исследования
Электрофорез и денситометрия.
Единицы измерения
Мг/дл (миллиграмм на децилитр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов) – 2α и 2β, – каждая из которых связана с гемом. HbA обеспечивает адекватный газообмен и тканевую оксигенацию. Фракция HbA2 – второстепенная форма гемоглобина, имеет формулу 2α2δ. Также у взрослого допустимо наличие следовых количеств фетального гемоглобина HbF (2α2γ), который является преобладающей фракцией в течение внутриутробного периода. В течение первых 6 месяцев жизни HbF замещается HbA.
Нарушения структуры гемоглобина обычно разделяют на две группы: гемоглобинопатии и талассемии, хотя талассемии являются формой гемоглобинопатии. Талассемии представляют собой нарушения синтеза α-, β- или обеих цепей гемоглобина. Также могут отмечаться нарушения синтеза δ-, γ- цепей. Большинство вариантов α- и β-талассемий сопровождается изменением уровня HbF и HbA2, поэтому определение этих изоформ может быть использовано для скрининга этих состояний.
Остальные гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Наиболее распространённые и клинически значимые аномальные варианты гемоглобина: S, D, E, C. Варианты HbS и HbD – патологические формы гемоглобина, которые обладают идентичной миграцией в щелочном геле и являются результатом точечных мутаций гена, кодирующего β-глобин. Варианты Е и С при данном методе мигрируют в составе фракции HbA2, при их наличии фракция HbA2 достигает более 25 %. Наибольшее клиническое значение представляет HbS-вариант, который приводит к серповидноклеточной анемии.
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.
Электрофорез является чувствительным методом, с помощью которого можно исключить гемоглобинопатии либо определить тактику дальнейшего обследования для установления точного диагноза заболевания. Метод характеризуется высокой внутрипостановочной (SD
Метод исследования основан на электрофорезе гемоглобина, полученного при лизисе отмытых эритроцитов обследуемого. После разделения гемоглобина на фракции производится окрашивание зон миграции. Содержание гемоглобина в составе фракций измеряется с помощью цифровой денситометрии.
Когда назначается исследование?
- Скрининг гемоглобинопатий;
- наличие семейного анамнеза гемоглобинопатий, планирование семьи;
- микроцитарная анемия, не связанная с дефицитом железа;
- гемолитическая анемия неустановленной этиологии;
- обнаружение изменённых эритроцитов (серповидная деформация) при микроскопическом исследовании крови.
Что означают результаты?
Референсные значения
Гемоглобин A | ≥ 96,5% |
Гемоглобин A2 | |
Гемоглобин F | |
Гемоглобин S/D | 0 % |
Важные замечания
- Тест обладает высокой достоверностью при скрининге β-талассемий, вариантов, приводящих к серповидноклеточной анемии, и синдромов персистенции фетального гемоглобина.
- При использовании данного метода может быть затруднена индентификация α+-талассемии (талассемия с одной мутацией).
Также рекомендуется
02-029 Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
06-276 Гепсидин-25
06-017 Железо в сыворотке
Кто назначает исследование?
Гематолог, терапевт, врач общей практики.
Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала – методика, показатели нормы
Принцип метода одинаков с заложенным в основу электрофоретического отделения сывороточных белков. В данном электрическом поле частицы, несущие определенную электрическую зарядку, перемещаются более или менее в зависимости от силы электрического поля, электрической зарядки, величины и формы молекулы.
Что касается гемоглобина основным фактором электрофоретического отделения является электрическая зарядка, поскольку форма и величина молекулы одинаковы для различных видов гемоглобина.
Электрофорез гемоглобина практикуется во всех используемых вариантах в отношении белков, в том числе, электрофорез на бумаге, в агаровом геле, в геле и блоке крахмала, в геле полиакриламида, на уксуснокислом целлюлозе. Каждая из этих разновидностей представляет свое преимущество, которое следует учитывать при выборе соответствующего метода.
Необходимая аппаратура — электрический источник питания и бак (ванна) для буфера; используемые материалы в качестве миграционной питательной среды почти полностью соответствуют применяемым для электрофореза сывороточных белков.
Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала отличается рядом преимуществ, в силу которых ему отдается предпочтение при исследовании гемоглобинопатии. На этой питательной среде можно отделить почти все виды физиологического и патологического гемоглобина, даже когда он находится в малом концентрации. Не требует окраски. Промывание и количественная оценка осуществляются легко, используемый крахмал не требует специальной обработки, дешевый и побывается без затруднений.
Материалы для электрофореза гемоглобина в блоке крахмала: картофельный крахмал; аппарат для электрофореза, слагающийся из выпрямителя, бака для буфера и пластинки из плексигласса, на которую наносится крахмал; буфер веронал-мединал — 8,8 показатель водорода и 0,5 ионная мощность; веронал 1,84; мединал 10,8; лактат кальция 0,384; дистилированная вода до 1000 мл; 2% раствор цианистого натрия.
Методика электрофореза гемоглобина в блоке крахмала
В стекляную или эмалированную посуду насыпать 150—200г крахмала и залить 300—400 мл дистилированной воды. Помешать, после осаждения крахмала слить воду и налить буфер веронал-мединал; хорошо перемешать и оставить 30—40 минут, в случае надобности можно сохранить на ночь в холодильнике. После гомогенизации приготовленный таким образом крахмал наносится на пластинку плексигласса, при этом слой его должен иметь 5 мм толщины.
Поскольку по краям пластинки имеется ободочек соответствующей толщины, крахмал не стекает с пластинки. Слой оседаемого крахмала однородный. Лишнее количество буфера удалить фильтровальной бумагой.
На одну пластинку крахмала можно нанести одновременно несколько проб для миграции, причем их число зависит от величины пластинки. Наносить их (по 2—3 капли) на расстоянии 4—5 см от края пластинки, между образцами оставлять расстояние 3—4 см.
До начала миграции гемолизаты обработать цианистым натрием в целях преобразования гемоглобина в цианметгемоглобин — весьма устойчивый вид. На 5—6 капель раствора гемоглобина добавить каплю 2% раствора цианистого натрия.
Пластинку спустить в бак, при этом пятна направляются в сторону отрицательных электродов; связь с буферным раствором наладить с помощью фильтровальной бумаги. Миграция происходит при напряжении 200 вольт, ампераж в зависимости от размеров пластинки с крахмалом и толщины слоя последнего. Время миграции 18—20 часов.
В описанных условиях проба гемоглобина от человека в норме мигрирует от отрицательного к положительному полюсу и делится на две фракции: основную (97—98%) на первом плане, представляющую собой гемоглобин А1, а позади, на расстоянии 3—4 см, вторую (2—3%), составляющую гемоглобин А2.
При таких условиях из крови пуповины также отделяются две фракции: одна из них составляет 30—40% — гемоглобин А1, вторая — гемоглобин Ф, расположенная между гемоглобином А1 и гемоглобином А2, на очень близком расстоянии от первого.
Количественное определение отделенных, путем электрофореза, фракций осуществляется промыванием а затем фотометрированием.
Отделенные пятна вырезать и каждый из них вложить в пробирку. В другой пробирке промыть участок чистого крахмала, соответствующего по величине площади, занимаемой гемоглобином А2, в качестве контрольного препарата для фотометрирования.
В каждую пробирку влить одинаковое количество буфера. Взболтать, гемоглобин переходит в раствор, в то время как крахмал оседает на дно пробирки. После оседания надосадочную массу профильтровать, процентрифугировать и прочитать результат с помощью фотометра или спектрофотометра с фильтром, соответствующим длине волны 540 нм. Значение данной фракции в процентном отношении выводится из суммы экстинкий, составляющей 100% экстинкций каждой фракции, деленной на общую экстинкцию.
Нормальные физиологические значения гемоглобина, полученные в подобных условиях, составляют 2—3% гемоглобина А2 и 97—98% гемоглобина А1.
Если подвергнуть электрофорезу раствор гемоглобина из крови больного с аномальным гемоглобином, то последняя, в зависимости от имеющейся в ней электрической зарядки, мигрирует медленнее или быстрее нормального гемоглобина, тем самым способствуя ее отделению и количественному определению.
Вливаемый в ванну буфер можно исплоьзовать несколько раз, при условии изменения направления тока после каждой миграции.
– Также рекомендуем “Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормы”
Оглавление темы “Лабораторная диагностика в гематологии”:
- Техника пункции костного мозга – получения материала для миелограммы
- Исследование костного мозга – миелограмма
- Исследования обмена железа радиоактивным железом Fe59
- Методика определения объема крови и массы эритроцитов
- Исследование продолжительности жизни эритроцитов – норма
- Исследование продолжительности жизни тромбоцитов – норма
- Отбор, приготовление и хранение проб крови при гемоглобинопатиях
- Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала – методика, показатели нормы
- Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормы
- Определение щелочноустойчивого гемоглобина – методика
- 2020
Электрофорез гемоглобина – это анализ крови, используемый для измерения и определения различных типов гемоглобина в вашем кровотоке. Гемоглобин – это белок внутри красных кровяных телец, ответственный
Содержание:
- Что такое тест электрофореза гемоглобина?
- Нормальный уровень типов гемоглобина
- Зачем делают электрофорез гемоглобина
- Где и как проводится тест электрофореза гемоглобина
- Риски электрофореза гемоглобина
- Чего ожидать после теста
Что такое тест электрофореза гемоглобина?
Электрофорез гемоглобина – это анализ крови, используемый для измерения и определения различных типов гемоглобина в вашем кровотоке. Гемоглобин – это белок внутри красных кровяных телец, ответственный за транспортировку кислорода к тканям и органам.
Генетические мутации могут привести к тому, что ваше тело будет вырабатывать неправильно сформированный гемоглобин. Этот аномальный гемоглобин может привести к тому, что кислород не достигнет ваших тканей и органов.
Существуют сотни различных типов гемоглобина. Они включают:
- Гемоглобин F: Это также известно как гемоглобин плода. Это тот тип, который встречается у растущих плодов и новорожденных. Он заменяется гемоглобином А вскоре после рождения.
- Гемоглобин А: Это также известно как взрослый гемоглобин. Это наиболее распространенный вид гемоглобина. Он встречается у здоровых детей и взрослых.
- Гемоглобин C, D, E, M и S: Это редкие типы аномального гемоглобина, вызванные генетическими мутациями.
Нормальный уровень типов гемоглобина
Тест электрофореза гемоглобина не говорит вам о количестве гемоглобина в вашей крови – это делается при общем анализе крови. Уровни, на которые ссылается тест электрофореза гемоглобина, представляют собой процентное соотношение различных типов гемоглобина, которые могут быть обнаружены в вашей крови. У младенцев и взрослых это отличается:
У младенцев
Гемоглобин у плода в основном состоит из гемоглобина F. Гемоглобин F по-прежнему составляет большую часть гемоглобина у новорожденных. К тому времени, когда вашему малышу исполнится год, он быстро снижается:
| Возраст | Процент гемоглобина F |
| новорожденный | От 60 до 80% |
| 1+ год | От 1 до 2% |
У взрослых
Нормальные уровни гемоглобина у взрослых:
| Тип гемоглобина | процент |
| гемоглобин А | От 95% до 98% |
| гемоглобин А2 | От 2% до 3% |
| гемоглобин F | От 1% до 2% |
| гемоглобин S | 0% |
| гемоглобин С | 0% |
Зачем делают электрофорез гемоглобина
Вы приобретаете различные аномальные типы гемоглобина, унаследовав генные мутации в генах, ответственных за производство гемоглобина. Ваш врач может порекомендовать тест электрофореза гемоглобина, чтобы определить, есть ли у вас заболевание, которое вызывает образование аномального гемоглобина. Причины, по которым ваш врач может попросить вас сделать тест электрофореза гемоглобина, включают:
1. В рамках планового осмотра: Ваш врач может проверить ваш гемоглобин, чтобы затем сдать общий анализ крови во время обычного медицинского осмотра.
2. Для диагностики заболеваний крови: Ваш врач может попросить вас сделать тест электрофореза на гемоглобин, если у вас наблюдаются симптомы анемии. Этот тест поможет им обнаружить аномальные типы гемоглобина в вашей крови. Это может быть признаком нарушений, в том числе:
- серповидноклеточная анемия
- талассемия
- истинная полицитемия
3. Для наблюдения за лечением: Если вы лечитесь от состояния, которое вызывает аномальные типы гемоглобина, ваш врач будет контролировать ваши уровни различных типов гемоглобина с помощью электрофореза гемоглобина.
4. Для скрининга генетических заболеваний: Люди, у которых в семейном анамнезе есть наследственные анемии, такие как талассемия или серповидно-клеточная анемия, могут выбрать скрининг на эти генетические нарушения до рождения детей. Электрофорез гемоглобина покажет, есть ли какие-либо аномальные типы гемоглобина, вызванные генетическими нарушениями. Новорожденные также обычно проходят скрининг на эти генетические нарушения гемоглобина. Ваш врач может также захотеть проверить вашего ребенка, если у вас есть семейная история аномального гемоглобина или у него анемия, не вызванная дефицитом железа.
Где и как проводится тест электрофореза гемоглобина
Для подготовки к электрофорезу гемоглобина не нужно делать ничего особенного.
Обычно для сдачи крови нужно пойти в лабораторию. В лаборатории медработник берет образец крови из вашей руки или руки: сначала он очищает это место тампоном со спиртом. Затем они вставляют небольшую иглу с трубкой для сбора крови. Когда набрано достаточно крови, иглу удаляют и накрывают место марлевым тампоном. Затем они отправляют ваш образец крови в лабораторию для анализа.
В лаборатории процесс, называемый электрофорезом, пропускает электрический ток через гемоглобин в вашем образце крови. Это вызывает разделение разных типов гемоглобина на разные полосы. Затем ваш образец крови сравнивается со здоровым образцом, чтобы определить, какие типы гемоглобина присутствуют.
Риски электрофореза гемоглобина
Как и при любом анализе крови, здесь риски минимальны. Это включает:
- кровоподтеки
- кровотечение
- инфекция в месте прокола
В редких случаях после забора крови вена может набухать. Это состояние, известное как флебит, можно лечить с помощью теплого компресса несколько раз в день. Продолжающееся кровотечение может быть проблемой, если у вас нарушение свертываемости крови или вы принимаете разжижающие кровь лекарства, такие как варфарин (кумадин) или аспирин (буферин).
Чего ожидать после теста
Если ваши результаты показывают аномальный уровень гемоглобина, они могут быть вызваны:
- болезнь гемоглобина C, генетическое заболевание, которое приводит к тяжелой анемии
- редкая гемоглобинопатия, группа генетических нарушений, вызывающих аномальное производство или структуру красных кровяных телец
- серповидноклеточная анемия
- талассемия
Ваш врач проведет дополнительные анализы, если результаты электрофореза гемоглобина покажут, что у вас аномальные типы гемоглобина.
Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормыЭлектрофорез на уксуснокислой целлюлозе составляет быстрый и чувствительный метод. Отделяет как физиологические, так и патологические фракции, даже если они находятся в очень малой концентрации. Материал для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе: буфер трис-ЭДТА-борная кислота [трис (гидроксиметиламинометан) 14,50; 1,50 г ЭДТА (келатон 2); 0,90 г. борной кислоты; до 1000 мл дистилированной воды; 2% раствор цианида натрия; ленты уксуснокислой целлюлозы (сепрафор III, целаграмм, целлогель и пр.)]. Методы для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозеЛенты ацетата погрузить в буфер, затем протампонировать между двумя кусками фильтровальной бумаги и растянуть на опорную пластинку аппарата для электрофореза. Рама погружается в ванну для электрофореза. Для лучшего соединения с буфером на края лент ацетата наложить полоску фильтровальной бумаги Ватмана. Спустя 10 минут после погружения в ванну с помощью капиллярной трубки нанести на отрицательный полюс каждой ленты образец гемоглобина, в виде очень узенькой полоски. Когда ленты широкие, можно нанести несколько образцов. Гемоглобин наносится в виде цианметгемоглобина (5—6 капель раствора гемоглобина на 1 каплю цианида). Подвергнуть двухчасовой миграции, при напряжении 200 в и ампераже 0,5 ма/см.
При таких условиях работы возможно отделить нормальные фракции гемоглобин — А1 и А2, равно как и все патологические фракции гемоглобина, иной электрической зарядки, чем нормальный гемоглобин. Элюцию фракций проводить, без окраски, в буфере трис. Что касается гемоглобина А2 и контрольного препарата элюцию делать в 3 мл буфера, в то время как для гемоглобина А1 использовать 15 мл буфера. В отношение патологи-гических фракций объем вещества для элюции определить в зависимости от количества аномального гемоглобина. Через 30 мин. после элюции, прочитать результат, с помощью Спеколя или спектрофотометра, при длине волны 415 нм. При расчете учитывать объемы, использованные для элюции, в том смысле что полученный, в отношение гемоглобина А1 результат следует помножить на 5. Сумма экстинкций, составляющая 100%, экстинкция каждой фракции деленная на общую экстинкцию, дает, в процентном отношении, значение соответствующей фракции. По этому методу нормальные значения для гемоглобина А2 колеблятся между 1,5—2,5%. Если по какой-либо частной причине ленты следует окрасить то, после промывания, на лентах помимо нормальной и патологических фракций появляются две белковые негемоглобинные фракции, располагающиеся позади гамоглобина А2, представляющие собой угольные ангидразы b и c. – Также рекомендуем “Определение щелочноустойчивого гемоглобина – методика” Оглавление темы “Лабораторная диагностика в гематологии”:
|
