Формула для подсчета гемоглобина
Количество гемоглобина можно определить или спектроскопически, посредством определения количества железа, или путем измерения красящей способности крови (колориметрически).
Для клинических целей используется последний метод, который требует небольшого количества крови и дает возможность быстро определить количество гемоглобина. Наиболее распространенным является метод Говерса в видоизменении Сали.
Определение гемоглобина по Сали основано на том, что гемоглобин крови в растворе соляной кислоты переходит в солянокислый гематин, который и сравнивается с гематином определенной концентрации, взятом в качестве стандарта. Процент гемоглобина в этом случае определяется колориметрически.
Набор Сали состоит из запаянной стандартной пробирки, наполненной раствором солянокислого гематина. Ввиду того, что стандартная жидкость довольно быстро выцветает, в последнее время выпущены стандарты из цветного стекла, окрашенные под цвет солянокислого гематина металлическими окислами. Эти стандарты не выцветают даже под действием прямого солнечного света.
Между стандартными пробирками помещается пробирка, имеющая деления от 10 до 140 или от 10 до 170 такого же диаметра, как и первая. Пробирка с делением от 10 до 140 предназначена для определения гемоглобина в единицах Сали, а от 10 до 170—в процентах.
Подставка, в которой помещаются стандартные и градуированные пробирки, представляет собою деревянную колодку с вырезанными продольными отверстиями и углублениями для них. Сзади колодки прикреплено матовое стекло, которое дает рассеянный свет; на его фоне резко оттеняется окраска стандарта и испытуемой сыворотки.
Для взятия крови прилагается капиллярная пипетка с меткой 20 мм, которая определяет количество крови, взятой для исследования.
Кроме гемоглобинометра, для определения гемоглобина необходимо иметь N/10 раствор НС1 и дистиллированную воду.
Техника определения следующая. В градуированную пробирку до метки 20 набирается N/10 раствор НС1, затем в капилляр до метки 20 мм3 насасывается кровь и, осторожно очистив конец капилляра, переносят ее в пробирку
Рис. Гемоглобинометр Сали.
С соляной кислотой. Кровь осторожно выдувают в А710 раствор соляной кислоты, содержимое пробирки из верхнего прозрачного слоя набирается в капилляр и снова выдувается в пробирку.
Капилляр промывается 2 или 3 раза и осторожно удаляется из пробирки. Кровь гемолизируется, и при распаде образуется солянокислый гематин. Жидкость постепенно становится коричневой. Спустя 5—7 минут после выдувания крови, в пробирку начинают прибавлять дистиллированную воду. Вначале прибавляют по нескольку капель, а затем, по мере изменения цвета и приближения его к стандарту,—то одной капле. Кровь смешивается или стеклянной палочкой с утолщением на конце или же покачиванием прсбирочки. Необходимо следить за тем, чтобы жидкость при смешивании не терялась.
Уровень жидкости после разведения указывает на количество гемоглобина. Учет ведется по нижнему мениску жидкости. Допустимой ошибкой при вторичном исследовании той же самой крови считается расхождение в пределах пяти делений. Метка 80 на пробирке с делением до 140 и цифра 100 на пробирке с делением до 170 соответствует 16,0—17,0 гемоглобина в 100 мл крови. Чтобы получить абсолютную цифру, показывающую количество гемоглобина в граммах в 100 мл крови, необходимо показания гемометра в процентах Сали умножить на 0,17, а количество в единицах— на коэффициент 0,2125.
Вид животного | Средний показатель в % Сали | Колебания | В 100 мл крови в г | Фамилия автора |
Крупный рогатый скот…. Овцы Козы Буйволы Яки Верблюды Лошади Свиньи Собаки Кошки Кролики Куры Гуси | 65 68 63 49 57 90 80 67 80 65 69 75 95 | 56—74 54—80 45—81 28—70 36—78 66—114 50—110 55—79 65—95 47—83 51—87 51—99 80—110 | 11,0 11,6 10,7 8,3 9,6 15,2 13,6 10,2 13,6 11,0 11,7 12,7 16,1 | Д. Соколов Л. Лебедев B. Чагин К. Мавсун-Заде П. Карасев Н. Семушкин C. Хрусталев A. Васильев B. Зайцев C. Веремейчик |
Количество гемоглобина у здоровых животных колеблется в следующие пределах (см. табл. на стр. 418).
Колебания гемоглобина зависят от возраста, пола, породы, характера кормления и некоторых других условий. При патологических процессах количество гемоглобина может быть увеличено и уменьшено по сравнению с нормальными показателями.
Увеличение количества гемоглобина носит название плейохромии. Она может возникнуть вследствие сгущения крови при потере жидкости организмом (понос, рвота, потливость), при образовании экссудатов и транссудатов, Плейохромию отмечают при кровепятнистой болезни лошадей, интоксикациях и отравлениях. Повышение количества гемоглобина отмечается при физическом напряжении лошади. При хорошей подготовке (тренировка) количество гемоглобина остается почти без изменений.
Уменьшение гемоглобина (олигохромемия) встречается довольно часто и особенно при заболеваниях, связанных с анемией. Олигохромемия является симптомом острых и хронических заболеваний, различных по своему происхождению.
Олигохромемия связана с уменьшением общего количества эритроцитов или обеднением эритроцитов гемоглобином. Следовательно, олигохромемия определяет не только степень, но и характер анемии. Необходимо, однако, учесть, что правильная оценка может быть сделана только при условии подсчета эритроцитов и определения величины цветного показателя.
Определение цветного показателя. Цветной показатель дает представление об отношении гемоглобина к красным кровяным тельцам. Метод определения цветного показателя основан на сравнении. Если в норме цветной показатель равен примерно единице, то изменение этой цифры в сторону увеличения или уменьшения рассматривается, как весьма важный показатель нарушения соотношения между эритроцитами и гемоглобином.
У животных определение цветного показателя проводится по формуле:
Гемоглобин 2 Эритроциты 2 Гемоглобин 2 х эритроциты 1
Гемоглобин 1 / эритроциты 1 = гемоглобин 1 x эритроциты 2
Где гемоглобин 1 и эритроциты 1 показывают среднее количество гемоглобина и эритроцитов у здорового животного и гемоглобин 2 и эритроциты 2—найденное количество гемоглобина и эритроцитов у исследуемых животных. Если у лошади взять за норму количество гемоглобина 75, а эритроцитов 7 500 000, то цветной показатель будет равен единице. Всякое отклонение в количестве гемоглобина и эритроцитов поведет к изменению цветного показателя. Необходимо учитывать только такие отклонения от нормы, которые превышают 15%. Небольшие отклонения учитывать не следует.
Определение цветного показателя имеет значение в дифференциации анемий. При постгеморрагических анемиях, когда имеется одновременно уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина, цветной показатель приближается к единице; ниже единицы цветной показатель бывает при вторичных анемиях, при которых снижается количество гемоглобина, при почти нормальном или слегка сниженном количестве эритроцитов; выше единицы цветной показатель отмечается при гемолитических анемиях, когда в ток крови выбрасывается значительное количество молодых клеток (повышенная регенерация).
Для суждения о средней насыщенности эритроцитов гемоглобином практически можно использовать определение кровяного числа. Оно получается делением найденного количества гемоглобина на число эритроцитов в миллионах, например:
75% / 7(000000) = 11 или 90% / 10(000000) =9
Величина кровяного числа неодинакова у различных животных и зависит от количества эритроцитов и гемоглобина в норме, но в среднем она приближается к 10.
Источник
Методика определения уровня гемоглобина крови. Норма гемоглобина
Дозировка гемоглобина имеет первостепенное значение для оценки эритроцитного раздела, поскольку представляет собой функциональный элемент. Учитывая тот факт, что гемоглобин в чистом состоянии получается весьма трудно, и как таковой не подлежит дозировке, в текущей практике применяются косвенные методы дозировки.
Среди многочисленных существующих способов наиболее простым и точным методом гемоглобинометрии считается фотометрическое определение в виде цианметгемоглобина, а для эталонирования фотометров — использование стандартных растворов цианметгемоглобина, приготовленных из человеческого гемоглобина.
Принципы определения гемоглобина в крови. Железосинеродистый калий окисляет железистое железо гемоглобина, в результате чего все виды гемоглобина крови преобразуются в метгемоглобин. Последний комбинируется с цианистым калием, образуя цианметгемоглобин или циангемоглобин — наиболее устойчивое производное гемоглобина.
Состав используемого реагента следующий (по van Kampen-Zijlstra):
– Железосинеродистый калий [K3Fe(CN)6] 0,2 г
– Цианистый калий (KGN) 0,05 г
– Монокалиевый фосфат (КН2РО4) 0,14 г
– Дистилированная вода до 1000 мл
Показатель водорода реагента должен укладываться в пределы от 7,2 до 7,5, быть прозрачным и очень стойким. После приготовления раствор пропускается через качественный бумажный фильтр и хранится в герметически закрытых баллонах коричневого цвета, в холодильнике при температуре +4°. Хранить не более 1—2 месяцев. Периодически проверять чистоту раствора, в случае необходимости повторно фильтровать.
Раствор нетоксичен, поскольку концентрация цианистого калия значительно меньше ядовитой дозы.
Техника определения гемоглобина в крови. Влить 0,02 мл крови (содержащийся в одной пипетке гемоглобин) в пробирку с 5 мл реагента, перемешать и отставить на 20 мин. Прочет результата делать с помощью фотометра с фильтром S53 в ванночке, величиной 1 см, по сравнению с дистилированной водой.
Концентрация гемоглобина (в г/100 мл крови) определяется по формуле: Гемоглобин в г/100 мл = экстикция пробы х К(стандартная концентрация гемоглобина/стандартная экстинкция).
Калибровка фотометров осуществляется с помощью стандартного раствора гемоглобина, который у нас в стране поставляется бухарестским гематологическим Центром. Способ простой, точный, погрешность минимальная (±2%), воспроизводимость удовлетворительная.
Нормальные значения колеблятся в зависимости от возраста, пола высоты над уровнем моря.
У взрослого: мужчин = 15 ± 2 г/100 мл, а женщин = = 13 ± 2 г/100 мл.
У детей от двухлетнего возраста до половозрелости значения растут прогрессивно от 11 до 13 г/100 мл.
– Также рекомендуем “Методика определения уровня гематокрита крови. Норма гематокрита”
Оглавление темы “Гематология”:
- Показания для переливания цельной крови
- Показания для переливания эритроцитарной массы – способы получения
- Показания для переливания гранулоцитов (лейкоцитов) – способы получения
- Показания для переливания лимфоцитов
- Показания для переливания тромбоцитов – способы получения
- Показания для пересадки костного мозга – техника
- Забор венозной крови для анализов – гемограммы
- Методика определения уровня гемоглобина крови. Норма гемоглобина
- Методика определения уровня гематокрита крови. Норма гематокрита
- Методика подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов с помощью гемоцитометра
Источник
Определение
содержания гемоглобина в крови
производится колориметрическими
способами, один из которых (гематиновый
метод Сали) основан на образовании
устойчивого раствора коричневого
цвета при взаимодействии гемоглобина
с соляной кислотой. Принцип
колориметрического способа заключается
в том, что если исследуемый раствор
путем разбавления довести до окраски,
одинаковой со стандартным раствором,
то концентрация растворенных веществ
в обоих растворах будет одинакова, а
количества веществ будут соотносится
как их объемы. В стандартном растворе
гемоглобина содержится 167 г/л.
Ц
е л ь р а б о т ы: освоить методику
определения гемоглобина и найти
содержание гемоглобина в исследуемой
крови.
Д
л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр
Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н
раствор соляной кислоты, дистиллированная
вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная
палочка, стерильная инъекционная игла,
вата, спирт, йод, эфир, стерильный
скарификатор. Объект исследования –
человек.
Х
о д р а б о т ы
В
среднюю пробирку гемометра налить 0,1
н раствор соляной кислоты до нижней
кольцевой метки. Из пальца обычным
способом набрать в капилляр кровь без
пузырьков до метки. Излишек крови можно
удалить из капилляра прикладыванием
ваты или фильтровальной бумаги к кончику
капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки
из капилляра так, чтобы верхний слой
кислоты остался неокрашенным. Не
вынимая капилляр, промыть его раствором
соляной кислоты из верхнего слоя
пробирки гемометра. После этого
содержимое пробирки перемешать
стеклянной палочкой и поставить в
гемометр на 5-10 мин. Это время необходимо
для полного превращения гемоглобина
в солянокислый гематин
Затем
к содержимому пробирки прибавить по
каплям дистиллированную воду, каждый
раз перемешивая раствор стеклянной
палочкой до тех пор, пока цвет полученного
раствора не станет одинаковым с цветом
стандартного раствора боковых ампул
гемометра. Цифра, стоящая на уровне
нижней границы мениска полученного
раствора отражает содержание гемоглобина
в исследуемой крови в грамм-процентах
(г%).
Перевод
полученных данных в единицы системы
СИ (в г/л) производят путем умножения
измеренного количества гемоглобина в
г% на 10. Зарисовать гемометр и
капилляр.
В
выводе сравнить с нормой полученное
содержание гемоглобина в исследуемой
крови.
4) Подсчет количества эритроцитов
Ц
е л ь р а б о т ы: освоить методику и
определить количество эритроцитов в
исследуемой крови.
Д
л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп,
счетная камера Горяева, меланжер для
эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия,
покровные стекла, регулируемая пипетка,
пробирки, стерильный скарификатор,
вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования
– человек.
Х
о д р а б о т ы
Необходимо
перед началом работы рассмотреть
счетную камеру под микроскопом, найти
малые квадратики и большие квадраты
сетки (рис.1). Камеру предварительно
необходимо подготовить путем притирания
покровного стеклышка к боковым
выступающим граням камеры до появления
цветных (ньютоновских) колец. В каплю
свежей крови, полученной из пальца,
погрузить кончик меланжера (с красной
бусинкой в расширении) для эритроцитов
и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы
в капилляр не
попали
пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь
не свернулась, перенести кончик меланжера
в 3 % раствор хлорида натрия и набрать
его до метки 101, т.е. развести кровь в
200 раз. После этого взять заполненный
меланжер (смеситель), зажать его концы
1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-
вать.
После тщательного перемешивания крови,
удалив предварительно 1-2 капли, нанести
небольшую капельку на сетку камеры.
При
необходимости такое же разведение
может быть выполнено другим способом.
Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 %
NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в
этом случае тщательно перемешивается.
Если
капля разведенной крови будет слишком
велика, то жидкость может попасть на
боковые грани камеры и высота слоя над
сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае
камеру следует промыть дистиллированной
водой, насухо вытереть и заполнить
снова. Разведенную (в меланжере) кровь
следует еще раз перемешать.
Заполнив
камеру, поместить ее под микроскоп и,
если форменные элементы расположены
равномерно (что является показателем
хорошего перемешивания крови), приступить
к подсчету. Считать эритроциты удобнее
при большом увеличении.
Необходимо
подсчитать число эритроцитов в 5 больших
квадратах, расположенных в разных
местах сетки, например, по диагонали.
Во избежание двухкратного подсчета
клеток, лежащих на границе между малыми
квадратиками, руководствоваться
правилом Егорова, согласно которому,
относящимися к данному квадратику
считаются эритроциты, лежащие как
внутри квадратика, так и на его левой
и верхней границе. Эритроциты, лежащие
на правой и нижней границе для данного
квадратика не учитываются.
Формула
для вычисления количества эритроцитов
в 1 мм3
крови:
А
х 4000 х 200
N
= ————————,
где:
80
N
– искомое число эритроцитов;
А
– число эритроцитов в 80 маленьких
квадратиках (или в 5 больших);
4000
– множитель для получения содержания
эритроцитов в одном мм3
крови;
200
– степень разведения эритроцитов.
Для
перевода полученного количества
эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное
количество эритроцитов умножить на
106
и выразить в N х 1012
/л (тера на литр). Зарисовать фрагмент
сетки камеры Горяева с маленькими и
большими квадратами.
В
выводе сравнить количество подсчитанных
эритроцитов с нормой.
Соседние файлы в предмете Нормальная физиология
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
Анализ крови – один из самых необходимых. Определение концентрации гемоглобина в крови пациента позволяет выявить многие заболевания или пограничные состояния. Благодаря распространенным способам анализа исключают или выявляют анемии и следят за уровнем эритроцитов. Современные методики с точностью позволяют изучить состав кровяных телец и подсчитать их количество.
Клиническое значение определения гемоглобина
У мужчин показатель содержания гемоглобина в крови варьирует в пределах 120-160 г на литр, а у женщин – 110-150 г/л. Это объясняется тем, что мужчины более плотные по строению и имеют высокую мышечную массу. Иногда наблюдается снижение концентрации этого показателя в связи физиологическими и патологическими состояниями:
- беременность и послеродовой период;
- болезни костного мозга;
- недостаток витамина В12 и фолиевой кислоты;
- снижение количества эритроцитов из-за нехватки железа;
- кровопотери.
Наряду с анемией встречается и завышение показателя:
- избыток эритроцитов или эритроцитоз. Встречается при злокачественных новообразованиях и болезнях костного мозга;
- эритроцитоз вследствие заболеваний сердца и сосудов;
- снижение количества плазмы крови, что делает ее вязкой и увеличивает количество кровяных телец в литре биологической жидкости.
Гемоглобин образуется в красных кровяных клетках после утраты ядра и созревания клетки, период жизни которой длится не более 120 дней. После утилизации клетки в селезенке, в кровь выделяется железо, которое доставляется в костный мозг. Далее этого образуются новые эритроциты.
Методы измерения гемоглобина в крови
Для измерения показателя в крови используют несколько колориметрических способов:
- Гемиглобинцианидный.
- Гемихромный.
- Метод Сали.
- Аммиачный.
После любого из методов используют полуавтоматический анализатор, измеряющий спектр длины волны молекулы гемоглобина.
Автоматические методы не смогут распознать нарушения состава крови, но исключат ошибки в подсчёте параметров. Ручной метод используется с применением реактивов и биологической жидкости и способен определить лишь наличие или отсутствие клеток.
Гемиглобинцианидный метод
Гемоглобин имеет много форм, что затрудняет измерение его длины волны. Чтобы сделать процедуру проще, этот показатель переводят в метгемоглобин. Для точности результата используют специальное оборудование: мерные пробирки, фотоэлектроколориметр, трансформирующий раствор. Нормальный показатель длины волны – 540 нм, в этом диапазоне и работает прибор. Расчёты производят по формуле, а итоговый показатель переводят в граммы на литр (г/л).
Интересный факт!
Этот метод применяется для определения уровня гемоглобина все реже, в связи с опасностью для лаборантов, так как реактив может вызвать ожоги кожи и слизистых.
Гемихромный метод
С помощью безопасных специальных реактивов гемоглобин переводят в циангемоглобин. Для этого используют SDS, соли жирных кислот, четвертичный аммоний. В результате образуется гемихром, который также измеряется методом колориметрии в фотометре, при длине волны 540 нм. В конце также используют формулу для расчёта и переводят единицы измерения в г/л.
Плюсом такого метода можно назвать быстроту реакции и получение результата за считанные минуты. Лаборатории часто применяют этот метод с использованием реактивов Ольвекс. Они полностью безопасны, долговечны и экономичны.
Метод Сали
Более устаревший способ анализа, который используют редко. Принцип заключается в добавлении в биоматериал хлористоводородной кислоты, что помогает перевести гемоглобин в солянокислый гематин. Далее добавляют дистиллированную воду до коричневой окраски и сравнивают цвета с контрольной пробиркой. Отметка на пробирке указывает на количество вещества в 100 г крови. Для получения результата в литре показатели умножают на десять и вычисляют показатель с помощью пропорции.
Аммиачный метод
Этот метод основан на предыдущих, только в качестве раствора используют аммиак 0,04%. Пробу настаивают для перехода всех форм гемоглобина в одну. Далее рассчитывают результат с помощью фотометра при длине волны 543 нм. Наиболее точным считается гемихромный метод. Таким образом можно исключить риск ошибки, так как все расчеты ведут, основываясь на показателях прибора. Кроме того, этот способ наиболее безопасный и не несет вреда для лаборантов.
Гемоглобин — это важный показатель для врача и пациента. С помощью такого анализа можно судить о наличии заболевания, кровотечения и состояния сердечно-сосудистой системы. Важно проводить анализ с целью профилактики, чтобы не допустить анемию или патологическое превышение показателя. Полученные данные лаборатории должны быть интерпретированы врачом. Только так можно избежать осложнений заболеваний и получить правильное лечение.
Источник