Гемолитическая анемия реакция кумбса

Кумбса реакция (R. R. А. Coombs, английский иммунолог, род. в 1921 г.; син.: проба Кумбса, антиглобулиновый тест) — иммунологическая реакция для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов.

Реакция была разработана в 1908 г. Мореши (С. Moreschi), но получила широкое применение лишь с 1945 г. после того, как Кумбсом была показана ее роль в определении совместимости при гемотрансфузиях, резус-конфликте, диагностике аутоаллергических и аутоиммунных состояний и др.

Кумбса реакция основана на использовании в ней специально приготовленного препарата — антиглобулиновой сыворотки. В присутствии антиглобулиновой сыворотки эритроциты, нагруженные неполными антителами, агглютинируются. Эритроциты, не содержащие на своей поверхности антител, остаются неагглютинированными.

Кумбса реакция широко применяется для: а) установления состояния изосенсибилизации, т. е. обнаружения изоантител, возникающих при повторных переливаниях крови (см. Переливание крови) или беременностях (см. Беременность); б) выполнения пробы на совместимость при гемотрансфузиях; в) определения в эритроцитах разновидности резус-фактора (см.); г) обнаружения аутоиммунных антител на эритроцитах больных приобретенной гемолитической анемией (см.) и другими аутоаллергическими болезнями (см.), а также при некоторых инфекциях, протекающих с аллергическим компонентом; д) обнаружения изоиммунных антител, фиксированных на эритроцитах детей, страдающих гемолитической болезнью новорожденных (см.). К. р. применяется также в судебно-медицинских и антропологических исследованиях.

Основным материалом для постановки К. р. являются сыворотка или цитратная плазма и эритроциты, больного. Различают два варианта К. р.: непрямую и прямую. При непрямой К. р. изучают сыворотку больного, в к-рой определяют свободно циркулирующие антитела. При прямой К. р. исследуют эритроциты на присутствие антител, фиксированных на этих форменных элементах крови.

Антиглобулиновую сыворотку для К. р. получают путем иммунизации лаб. животных (кроликов, коз, овец и др.) глобулинами, выделенными из сыворотки человека фракционированием этанолом, сернокислым аммонием или гель-фильтрацией на сефадексе. При получении антиглобулиновой сыворотки необходимо удалить гетероагглютинирующие антитела, возникающие в результате иммунизации животных глобулинами человека. Достигают этого путем адсорбции иммунной сыворотки смесью эритроцитов людей с различной группой крови [0(1), А(II), В(II), AB(IV)] или разведением ее изотоническим р-ром хлорида натрия. В последнем случае титр гетеро-агглютининов должен быть невысок (1 : 16 — 1 : 32), с тем чтобы антиглобулиновая сыворотка после разведения сохранила хорошую активность в К. р.

Непрямая Кумбса реакция

Непрямая Кумбса реакция проводится в два этапа. Первый этап выполняют в специально предназначенных для этой цели небольших пробирках размером 4 X 0,5 см. В каждую пробирку к трем каплям сыворотки (цельная, 1 : 2 и т. д.), в к-рой подозревают наличие антител, добавляют одну каплю осадка эритроцитов известного антигенного состава. Содержимое пробирки перемешивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час. Затем эритроциты троекратно отмывают изотоническим р-ром хлорида натрия. Второй этап состоит в приготовлении 5% взвеси отмытых эритроцитов и соединении на белой (фарфоровой) пластинке со смачиваемой поверхностью одной капли эритроцитов с одной каплей антиглобулиновой сыворотки. Учет результатов выполняют до 10 мин. Исключение ложноположительных результатов производят путем выполнения контрольных исследований. Использование изотонического р-ра хлорида натрия вместо антиглобулиновой сыворотки не должно сопровождаться агглютинацией эритроцитов. Выполнение непрямой К. р. в отношении эритроцитов известного фенотипа изоантигенов позволяет установить специфичность антител. Напр., исследование сыворотки больного с эритроцитами 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fya; 0(I), сDe, Kk, Fya; 0(I), cDE, Kk, Fya; 0(I), cde, kk, Fya показало положительный результат с образцом крови в 1-м и 4-м случаях; другие образцы крови (2, 3, 5-й случаи) показали отрицательный результат. Сыворотка содержит анти-Е-антитела. С помощью непрямой К. р. могут быть выявлены неполные антитела против антигенов: С, D, Е, с, е; К, k; Fya, Fyb; Lea, Leb; Jka, Jkb и др. (см. Группы крови).

Прямая Кумбса реакция

Прямая Кумбса реакция по технике выполнения соответствует второму этапу непрямой К. р.: троекратно отмытые изотоническим р-ром хлорида натрия исследуемые эритроциты больного (5% взвесь) соединяют с антиглобулиновой сывороткой. Прямую К. р. выполняют, когда есть основание полагать, что эритроциты исследуемого больного in vivo уже сенсибилизированы антителами. Положительная прямая К. р. служит диагиостическим признаком при гемолитической болезни новорожденных, обусловленной сенсибилизацией организма женщины к антигенам плода и проникновением антител через плаценту в организм ребенка, а также при приобретенной гемолитической анемии.

За последние годы Кумбса реакция существенно усовершенствована. С ее помощью удается не только констатировать наличие на эритроцитах антител, но и установить класс иммуноглобулинов (см.). Для этого используют сыворотку против отдельных классов иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA. Изоиммунные антитела против резус, Келл-антигенов, Даффи-антигенов и других антигенов, а также тепловые аутоиммунные антитела, как правило, относятся к IgG. Холодовые аутоиммунные антитела, а также изоиммунные антитела против Le и некоторых других антигенов, как правило, относятся к IgM. Природу IgA имеют лишь редко встречающиеся аутоиммунные антитела (см. Аутоантитела) .

Библиография: Дыгин В. П. Аутоиммунные заболевания в клинике внутренних болезней, Л., 1970, библиогр.;

Кассирский И. А. и Алексеев Г. А. Клиническая гематология, М., 1970; Косяков П. Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии, М., 1974, библиогр.; Воivin P. e. a. Les anemies hemolytiques, p. 93, P., 1971, bibliogr.; Clinical aspects of immunology, ed. by P. G. H. Geli а. о., Oxford, 1975; Coombs R. R. A., Mourant A. E. a. Race R. R. In-vivo isosensitisation of red cells in babies with haemolytic disease, Lancet, v. 1, p. 264, 1946.

E. А. Зотиков.

Иммунные гемолитические анемии – группа заболеваний, характеризующихся повреждением и преждевременной гибелью эритроцитов или эритрокариоцитов в связи с развитием иммунной реакции с участием IgG и IgM или иммунных лимфоцитов. Основные факторы, вызывающие разрушение эритроцитов – аутоиммунный процесс, гемотрансфузионные осложнения, эритробластоз плода и гемолиз, обусловленный действием некоторых лекарственных средств.

Гемолиз может происходить в самом кровеносном русле или вне сосудов: в печени, селезенке, костном мозге. В результате массовой гибели красных кровяных телец развиваются анемический и желтушный синдромы, свидетельствующие о нарушении функции печени, почек, дыхательной системы, системы кровообращения, других органов и систем организма. По данным статистики, распространенность иммунных гемолитических анемий составляет примерно 1 случай на 70-80 тысяч населения.

Иммунные гемолитические анемии

Возникновение этой группы заболеваний связано с воздействием различных неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды, приводящих к развитию иммунных реакций против собственных эритроцитов. Чаще всего встречается аутоиммунный механизм, при котором происходит выработка антител против неизмененных естественных антигенов мембраны эритроцитов, находящихся в кровяном русле, или их предшественников – эритрокариоцитов костного мозга. Первичный причинный фактор, вызывающий разрушение эритроцитов, неизвестен (идиопатическая форма).

При вторичных анемиях патологический процесс развивается на фоне хронического лимфолейкоза, лимфомы, антифосфолипидного синдрома или иммунодефицитных состояний. Чаще встречается тепловая форма аутоиммунной анемии, при которой внутренняя среда организма имеет нормальные температурные параметры, а на эритроцитах располагаются иммуноглобулины класса G и компоненты комплемента C3 и C4. Красные кровяные тельца разрушаются макрофагами в печени и селезенке. Менее распространенная холодовая форма может быть идиопатической или вторичной, связанной с инфекцией (инфекционным мононуклеозом и микоплазменной пневмонией), переохлаждением и лимфопролиферативными заболеваниями у больных старше 60 лет. Реакция антиген-антитело с гемолизом развивается в периферическом кровяном русле, где температура опускается ниже 32 градусов.

Иммунная гемолитическая анемия может возникать при фиксации на мембране эритроцита фрагмента, имеющего лекарственное, вирусное или бактериальное происхождение (гетероиммунная форма). Образовавшиеся гаптены превращают красные кровяные тельца в чужеродные клетки-мишени для иммунной системы, что в итоге приводит к гемолизу. Чаще всего такую реакцию вызывают антибиотики из группы пенициллинов, цефалоспоринов и тетрациклинов, противотуберкулезные препараты, анальгетики и антиаритмические средства.

Изоиммунная форма встречается при несовместимости крови матери и плода по группе крови или резус-фактору. При этом антиэритроцитарные антитела матери через плаценту проникают к плоду и вызывают разрушение эритроцитов. Подобный механизм наблюдается и при переливании (гемотрансфузии) несовместимой крови от донора пациенту.

Классификация иммунных гемолитических анемий

Выделяют изоиммунные, трансиммунные, гетерогенные и аутоиммунные гемолитические анемии.

1. К изоиммунным вариантам заболевания относятся посттрансфузионные осложнения, связанные с непереносимостью крови донора или неправильным соблюдением процедуры трансфузии, а также гемолитическая болезнь новорожденных.
2. При трансиммунных анемиях гемолиз возникает при попадании к плоду через плаценту антител от матери, болеющей аутоиммунной анемией.
3. Гетероиммунная (гаптеновая) анемия – результат изменения мембраны эритроцита при воздействии вирусов или лекарственных препаратов.
4. Аутоиммунные гемолитические анемии (с тепловыми и холодовыми агглютининами).

Болезнь чаще начинается остро: повышается температура тела, появляется озноб, головная боль и головокружение, одышка, боли в эпигастральной области и пояснице. Кожные покровы становятся бледными, затем желтушными, могут появиться геморрагии, увеличивается селезенка, печень, цвет мочи становится темным.

При холодовой форме иммунной гемолитической анемии нередко нарушается периферическое кровообращение с развитием синдрома Рейно, посинением и отечностью кожных покровов кистей рук, лица, ушных раковин. В некоторых случаях нарушение кровоснабжения тканей конечностей может привести к развитию гангрены пальцев стоп.

Тяжелое течение эритробластоза плода характеризуется развитием ядерной желтухи с поражением центральной нервной системы – билирубиновой энцефалопатии. При этом отмечается вялость, заторможенность, снижение аппетита, частые срыгивания, судорожный синдром. При пальпации обнаруживают увеличение селезенки, печени, периферических лимфоузлов.

Чтобы установить правильный диагноз, определить форму заболевания, необходимо тщательное обследование пациента со сбором анамнеза, проведением клинического физикального осмотра врачом-гематологом, аллергологом-иммунологом, инфекционистом, ревматологом и другими специалистами. Уже на этапе осмотра можно обнаружить бледность, желтушность кожных покровов и слизистых, пропальпировать увеличенную селезенку и печень. Выраженность спленомегалии и гепатомегалии уточняется при проведении ультразвукового исследования (УЗИ печени и селезенки).

Лабораторная диагностика подтверждает наличие нормо- или гипохромной (реже – гиперхромной) анемии, ретикулоцитоза, увеличение СОЭ, гипербилирубинемию. В анализе мочи может выявляться протеинурия, уробилинемия, гемоглобинурия. При исследовании пунктата костного мозга обнаруживаются признаки гиперплазии за счет активации эритропоэза. При гемолитической болезни новорожденных выявляется выраженный эритробластоз (100-150 тысяч в 1 мкл).

Диагноз аутоиммунной гемолитической анемии подтверждается положительной прямой пробой Кумбса (прямым антиглобулиновым тестом) или полибреновым тестом (сенсибилизированная проба Кумбса). Дифференциальная диагностика проводится с другими иммунными болезнями, различными формами анемий, гемобластозами, тяжелыми отравлениями, болезнями печени и почек.

Лечебная тактика различается при различных формах болезни. При аутоиммунном характере гемолиза с тепловыми антигенами проводится введение высоких доз иммуноглобулина, кортикостероидов, иногда – циклофосфамида и других иммуносупрессивных препаратов. Возможно применение плазмафереза. При неэффективности консервативной терапии рекомендуется проведение спленэктомии. При холодовой иммунной гемолитической анемии используется введение моноклональных антител (ритуксимаба), плазмаферез, трансфузия индивидуально подобранных, отмытых и подогретых эритроцитов.

При эритробластозе плода проводится дезинтоксикационная терапия, переливание крови или эритроцитарной массы. При пострансфузионных осложнениях необходимо проведение неотложных противошоковых мероприятий, борьба с синдромом диссеминированного внутрисосудистого свертывания.