Иммуноферментный анализ крови норма при гепатит с

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник

Иммуноферментный анализ крови норма при гепатит с

Лабораторные показатели при гепатите С позволяют определить общее состояние здоровья человека, степень, стадию, вирусную нагрузку, генотип заболевания. Гепатит имеет скрытое течение и часто выявляется в процессе обычных исследований крови. Также сдача анализов необходима перед началом и в процессе противовирусного лечения для оценки его эффективности. Чем раньше выявляется гепатит С, тем больше шансов на полное выздоровление.

Что покажут анализы на гепатит при инфекции

Показатели анализов при гепатите С сначала оценивает терапевт. После основных анализов врач может направить больного на дополнительное обследование: биопсию, УЗИ печени. Это позволит увидеть полную картину заболевания.

ИФА

Исследуя показатели крови при гепатите С, обязательно назначают иммуноферментный анализ (ИФА). Он показывает ответ иммунной системы на столкновение с вирусом HCV. На момент проведения обследования количество патогенных клеток может быть очень мало, а антитела к вирусу гепатита С уже циркулируют в кровеносной системе. Появляются они в срок от нескольких дней до 2 недель после инфицирования.

Анализ показывает только наличие и количество иммуноглобулинов G и М, поэтому диагноз с точностью поставить невозможно. Можно лишь определить стадию гепатита.

По иммуноглобулинам М видно, что человек только заразился. Это говорит об острой фазе патологии. Иммуноглобулины G свидетельствуют о хроническом течении болезни (более 6 месяцев) или об инфицировании в прошлом.

При исследовании показателей крови методом ИФА можно получить псевдоотрицательный результат. Это значит, что инфицирование произошло недавно и антитела еще не успели выработаться. Врачи называют этот период «диагностическим окном», который может длиться до полугода.

Также возможен ложноположительный результат, когда реагент связывается с неспецифическим белком сыворотки крови. Такой показатель возможен при:

наличии онкологии;

вакцинации, которая была проведена накануне взятия крови;

туберкулезе;

склеродермии, рассеянном склерозе и прочих аутоиммунных заболеваниях;

повышенной температуре тела.

Чтобы получить точные показатели, результаты ИФА интерпретируют совместно с ПЦР.

ПЦР

Полимеразная цепная реакция проводится для выявления РНК вируса в крови человека. Выделяется несколько видов ПЦР-анализа:

Качественный, благодаря которому выявляется генетический материал HCV.

Количественный анализ. Предназначен для определения вирусной нагрузки при гепатите С. Обязателен перед началом противовирусного лечения, а после на 1, 4, 12 и 24 неделе терапии для оценки ее эффективности.

Генотипирование для выявления генотипа вируса гепатита, поскольку он постоянно мутирует.

Расшифровкой показателей занимается врач-гепатолог. Он интерпретирует их в комплексе с результатами ИФА, биохимии крови, УЗИ и биопсии. В заключении при сдаче качественного анализа пишется:

Обнаружено. Это означает, что в крови человека выявлен генетический материал HCV, и инфицирование подтверждается.
Не обнаружено. Заражение не подтверждено или уровень РНК возбудителя находится ниже границы чувствительности аппаратуры.

Показатели количественного анализа:

Не обнаружено	Человек либо полностью здоров, либо концентрация РНК HCV ниже пределов чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл	Количество РНК очень мало. Данные показатели следует соотносить с результатами других анализов или проводить повторное обследование.
До 8*10^5 МЕ/мл	Незначительный уровень вирусной нагрузки. Свидетельствует об успешности ПВТ.
Более 8*10^5 МЕ/мл	Вирусная нагрузка имеет высокие показатели.
Более 2,4*10^7 МЕ/мл	При таких показателях назначается повторная сдача крови с разбавлением ее образца.

Расшифровка показателей генотипирования:

Не обнаружено	Человек полностью здоров либо уровень РНК вируса слишком мал.
Выявлена РНК вируса HCV	У больного редкий генотип HCV, который не относится к первым трем типам. Назначаются дополнительные анализы.
Присутствует РНК определенного типа	В заключении пишется определенный генотип (1а, 1b).

Когда анализ ПЦР является отрицательным, а ИФА — положительным, это означает, что человек ранее уже перенес гепатит С, но вылечился самостоятельно.

Общеклинический анализ крови

Посредством общего анализа крови при гепатите С определяется его стадия. Исследование включает в себя много показателей, которые меняются при воспалительном процессе в организме. Вот что показывает клинический анализ крови при заражении гепатитом С:

Уровень гемоглобина. У мужчин норма — 130-160 г/л, у женщин — 120-140 г/л. При хроническом гепатите С может оставаться в пределах нормы. Повышение показателей свидетельствует о гемохроматозе, снижение — о различных кровотечениях, приеме противовирусных препаратов. Если гемоглобин снижается ниже 100 г/л, ПВТ противопоказана.
Количество эритроцитов. Норма у женщин — 3,80–5,10×10¹² г/л, у мужчин — 3,50–5,7×10¹² г/л в зависимости от возраста. Снижение показателей может свидетельствовать о гемолитической анемии из-за диффузных изменений в печени. Увеличение (эритроцитоз) — о развитии гемохроматоза.
Лейкоциты и их фракции. Норма — 4-9×10⁹ г/л. Они могут быть в пределах нормальных значений или немного снижаться в зависимости от стадии гепатита С. Повышение лейкоцитов (лейкоцитоз) свидетельствует о том, что иммунные клетки активно борются с вирусом. При абсолютной лейкопении ниже 1,5 г/л ПВТ противопоказана.
Тромбоциты. Норма — 180-320 х 10⁹ г/л. При снижении этих показателей определяется дисфункция печени, нарушается свертываемость крови. Значительное сокращение клеток также может говорить об инфицировании HCV 1 генотипа. Если уровень тромбоцитов ниже 50 г/л, противовирусная терапия противопоказана.
СОЭ. Норма для мужчин 2-10 мм/ч, для женщин 2-15 мм/ч. Показатели увеличиваются при поражении клеток печени, серьезном воспалительном процессе в железе. Повышение происходит вследствие приема противовирусных лекарств.

Показатели биохимического анализа при гепатите С

Биохимический анализ крови при гепатите С является одним из самых достоверных способов диагностики заболевания, степени поражения тканей печени и общего состояния здоровья больного. Сдается он натощак с утра. Последний раз можно кушать как минимум за 10 часов до сдачи крови.

Билирубин

Это желчный пигмент, результат распада эритроцитов. Бывает прямым, непрямым и общим.

В норме показатели общего билирубина у женщин составляют от 8,5 до 19,8 мкмоль/л максимум, у мужчин — от 3,3 до 19 мкмоль/л максимум.

У человека с патологическими изменениями в печени количество общего пигмента не превышает 21,0 мкмоль/л. О том, что началась гипербилирубинемия, свидетельствует концентрация более 17,1 мкмоль/л. Если показатели повышены (от 30 мкмоль/л), наблюдается желтушный синдром. При этом выделяется три его формы:

тяжелая (более 160 мкмоль/л);
средняя (в пределах 87-160 мкмоль/л);
легкая (менее 86 мкмоль/л).

При достижении уровня 300 мкмоль/л развивается печеночная кома.

АЛТ, АСТ и коэффициент де Ритиса

АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (аспартатаминотрансфераза) — это ферменты, которые вырабатываются печенью. АСТ и АЛТ при гепатите С начинают активно распространяться за пределы железы.

Нормальный уровень АСТ у мужчин — до 47 МЕ/л, у женщин — до 30 МЕ/л. При гепатите С, который развивается без цирроза, этот показатель превышен в 4-6 раз, а с циррозом — в 6-10 раз.

Норма АЛТ у мужчин — до 45 МЕ/л, у женщин — до 35 МЕ/л. В случае гепатита С без цирроза количество фермента возрастает в 6-10 раз, с циррозом — более, чем в 10 раз.

Коэффициент де Ритиса — это соотношение АЛТ и АСТ. Вычисляется из полученных результатов исследования. Необходим для выявления проблем в работе печени и сердца. Самостоятельного значения он не имеет, рассчитывают только при отклонениях в показателях АЛТ и АСТ. У здорового человека коэффициент колеблется от 0,91 до 1,75. При снижении индекса менее 0,91 имеются проблемы с печенью. Если показатели варьируются от 0,55 до 0,83, это говорит о гепатите В и А, причем данные биохимические показатели видны за 2 недели до проявления первичных признаков.

Белок

Концентрация общего белка в сыворотке крови зависит от синтеза и распада глобулинов и альбумина — двух главных белковых фракций. У взрослых показатели 66-83 г/л — в пределах нормы. Снижение показателей до 60-63 г/л может говорить о развитии хронических заболеваний печени, воспалительных процессов, злокачественных новообразований.

Расшифровка низких результатов показывает недостаточность функции печени (гепатиты, цирроз печени). Сокращение количества общего белка до 50 г/л часто сопровождается гипопротеинемическими отеками тканей.

Щелочная фосфатаза

Это наиболее информативный фермент в анализе на печеночные пробы. При исследовании показателей при гепатите С внимание обращается на активность печеночного подвида. У взрослого здорового человека она лежит в пределах 30-90 Ед/л, у подростков — до 400 Ед/л, беременных женщин — до 250 Ед/л.

Повышенный уровень щелочной фосфатазы (в 10 и более раз) свидетельствует о механической желтухе, связанной с затруднением секреции прямого билирубина в желчный пузырь и поступлением желчи в кишечник. Это часто происходит при хроническом гепатите С.

Другие данные биохимии

При биохимическом исследовании крови выявляются также уровень креатинина. Это результат обмена белков в печени. Выводится вещество с мочой почками. Нормальные показатели у взрослых — 39,9-72 мкмоль/л. Когда уровень завышен, врачи подозревают нарушения в работе почек. Данный показатель необходимо проверять перед проведением противовирусной терапии для оценки ее безопасности.

Триглицериды — это жиры, которые содержатся в жировой ткани. Норма — 0,45-2,16 мкмоль/л для женщин, у мужчин — 0,61-3,62. Повышение этих показателей врач может расценивать как ожирение, сахарный диабет, заболевания печени (цирроз, гепатит, жировая дистрофия). Их уровень повышается также во время приема интерферонов.

Показатели анализа мочи

Общеклинический анализ мочи при гепатите С влияет на состояние печени, мочевыделительной системы, метаболизма. При инфицировании HCV меняются физические свойства мочи:

на ее поверхности появляется пена;
в процессе хронического течения заболевания цвет меняется со светлого до темно-коричневого.

При лабораторном исследовании выявляются следующие отклонения:

В урине появляется уробилиноген или билирубин — вещества, которые отсутствуют в моче у здорового человека.
Повышается уровень лейкоцитов из-за воспалительного процесса.

Также увеличивается удельный вес мочи, поскольку возрастает концентрация веществ.

Источник