Измерение гемоглобина на фотоколориметре кфк 3 с реактивом драбкина

2.3.1 Унифицированный метод определения количества гемоглобина на гемоглобинометре фотометрическом портативном МиниГЕМ

Принцип метода: Основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (р-р Драбкина). Под влиянием железисто – синеродистого калия гемоглобин окисляется до метгемоглобина (гемоглобина), который затем превращается при помощи калия в цианметгемоглобин (гемоглобинцианид).

Реактивы: 1) Трансформирующий р-р

Устройство: Гемоглобинометр МиниГЕМ 540 представляет собой специализированный фотометр, предназначенный для определения общего гемоглобина крови гемиглобинцианидным ме­тодом с фотометрированием на длине волны 540 нм.

Диапазон измеряемой прибором оптической плотности составляет от 0 до 0,9. Б, что соответствует концентрации общего гемоглобина крови от 0 до 360 г/л. В приборе используется стандартная проб подготовка – 20 мкл крови, разведение 1:250. Суммар­ная погрешность определения гемоглобина (с учетом погрешностей дозаторов и по­грешностей биохимического метода), полученная при сравнительных медицинских испытаниях, не превышает 2% (коэффициент вариации) во всем диапазоне измеряе­мых концентраций. При этом собственная погрешность гемоглобинометра как фото­метра – не более 1%, а воспроизводимость, оцененная по коэффициенту вариации, – не более 0,25%.

Два фактора обеспечивают это качество прибора:

высокая воспризводимость характеристик раствора гемиглобинцианида, который сохраняет свои свойства при надлежащем хранении долгие годы, в т. ч. коэффициента пересчета оптической плотности в концентрацию гемоглобина (или фактора калиб­ровки);

конструкция гемоглобинометра МиниГЕМ 540 обеспечивает высокую надежность фотометрических параметров прибора. МиниГЕМ 540 снабжен функцией саморегули­рования, он обладает многолетней стабильностью измерений.

Другая отличительная особенность гемоглобинометра – полностью автоматизирован­ная процедура фотометрирования.

Для определения гемоглобина достаточно опустить кювету с фотометрической про­бой в прибор, и через мгновенье на дисплее отобразится значение концентрации. Пере­счет оптической плотности раствора в концентрацию производится автоматически. Перед измерением прибор не нужно включать, “прогревать”, подстраивать или калибровать. Гемоглобинометр автоматически выключится при вынимании кюветы до следующего из­мерения.

Третья особенность гемоглобинометра МиниГЕМ 540 – его портативность и низкое энергопотребление.

Масса прибора без батарей не превышает 300 г. Питание от сети че­рез адаптер или от встроенных батарей. Ресурс батарей – 1 000 000 измерений, или 4 года работы.

Для контроля работоспособности гемоглобинометра используется контрольная стек­лянная мера, паспортизованная для каждого прибора. Внутрилабораторный и внешний контроль качества может проводиться с помощью обычных контрольных материалов -контрольных растворов гемоглобина.

Методика измерений:

подготовить пробирки, поместив в каждую из них по 5 мл трансформирующего рас­твора (раствор Драбкина);

во время взятия крови в каждую пробирку перенести по 20 мкл капиллярной крови( 0,02 мл пипеткой Сали) и тщательно перемешать раствор;

через 20 мин каждую пробирку перед измерением перемешать путем переворачивания пробирки вверх вниз (время лизирования) и провести серию измерений:

Учет результата:

перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки;

опустить оптическую кювету в фотометрическую ячейку прибора, при этом автома­тически произойдет фотометрирование реакционной смеси, сопровождаемое звуко­вым сигналом, и на индикаторе появится число, соответствующее концентрации гемоглобина;

записать результат измерения.

2.3.2 Унифицированный метод определения концентрации гемоглобина на мини -фотометре MF-1020

Введение: мини фотометры являются миниатюрными настольными приборами для измерения гемоглобина крови.

Особенности прибора: цифровой индикатор, кювета открытого типа, относительная устойчивость к светорассеиванию, двухканальная оптическая схема.

Прибор показывает концентрацию гемоглобина в г/л. Светопоглощение зеленого света с длиной волны(546 нм) раствором гемиглобинцианида напрямую переводятся в единицы измерения гемоглобина. Настройка и калибровка прибора осуществляется при помощи двух ручек – « ZERO» и «CAL» . К прибору прилагается светофильтр (калибратор), назначение которого – убедиться в исправности оптических и электронных узлов и калибровки минифотометра.

Масса прибора 1 кг 300 гр.

Порядок измерения:

1.Включите прибор.

2.В течение 10 мин прогрейте.

3.Убедитесь в том, что прибор правильно откалиброван.

4.Установите кювету с холостой пробой реагента трансформирующего раствора. 5.С помощью ручки « ZERO» на цифровом индикаторе установите нулевое значение. 6.Приготовьте кровь, разбавив ее 1:251 с трансформирующим раствором и проведите измерение.

Приготовление пробы:

1 .Двадцать микрометров крови (0,02 мл) необходимо разбавить в 5 ,0 мл трансформирующего раствора р-ра Драбкина- 1:21

2.Хорошо перемешайте (встряхните). Прежде чем приступить к измерению, подождите 5-10 мин, особенно если реагент не содержит детергент.

Калибровка минифотометра по стандартному р-ру гемиглобинцианида

Вставьте кювету, содержащую трансформирующий реактив (р-р Драбкина) в кюветный отсек.

При помощи ручки « ZERO» установите нулевое значение в цифровом табло.

Вставьте кювету, содержащую стандартный р-р гемиглобинцианида, в кюветный отсек.

При помощи ручки « CAL» установите данное значение стандартного калибровочного р-ра в цифровом табло (пример 150 г/л).

Повторите процедуру калибровки от пункта 1 до пункта 4.

Калибровка окончена, и Вы можете приступить к измерению

Калибровка минифотометра при помощи калибратора (по фактору)

1.Вставьте калибратор со светофильтром в кюветный отсек таким образом, чтобы была

видна надпись «ZERO» с цифровым значением (например, 0.1.6)

2.При помощи ручки «ZERO» установите это значение (п.п.0.1.6) в цифровом табло.

3.Переверните калибратор и вставьте его в кюветный отсек таким образом, чтобы

была видна надпись «CAL» с калибровочным значением (пример 159).

4.При помощи ручки «CAL» установите данное значение на цифровом табло.

Повторите процедуру от пункта 1 до пункта 4.

Калибровка окончена, и Вы можете приступать к измерениям.

Требования к реактивам:

1.Любая модификация р-ра пригодна для применения.

2.Разбавление 10 мкл крови в 2,5 мл трансформирующего не пригодно для этой модели.

3.Можно приготавливать самим р-р-1 раз в месяц, хранится в посуде из темного стекла.

2.3.3 Унифицированный метод определения гемоглобина на фотоэлектроколориметре

Принцип метода: Гемоглобин, взаимодей­ствуя с ацетонциангидрином, в присутствии железосинеродистого калия K3[Fe(CN)6] образует гемиглобинцианид красного цвета, интенсивность окраски которого пропор­циональна содержанию гемоглобина в пробе крови.

Реактивы: 1) трансформирующий раствор (0,5 мл ацетонциангидрина, 0,2 г железосинеродистого калия, 1 г гидрокарбоната натрия NaHCb растворяют в 1 л дистил­лированной воды; реактив стоек, хранится в посуде из темного стекла); 2) стандартный раствор гемиглобинцианида (раствор, выпускаемый фирмой «Ренал», содержит 59,75 мг% гемиглобинцианида; раствор фирмы «Иммуна» —64,23 мг%. Это соответствует концентрации гемоглобина в крови 150 и 154 г/л при разведении ее в 251 раз).

Ход определения. К 5мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл (капилляр Сали) крови. При этом кровь разводится в 251 раз. Оставляют пробирки на 20 мин при комнатной температуре.

Фотометрируют при зеленом светофильтре (длина вол­ны 540 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм (1 см) против дистиллированной воды.

Стандартный раствор фотометрируют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Расчет. Содержание гемоглобина определяют по калибровочному графику, который строится по стандар­тному раствору гемиглобинцианида или по формуле:

С=Е о/ Е к х 120

Где С- концентрация гемоглобина в опытной пробе, г/л

Ео – оптическая плотность опытной, ед. опт. Плотность

Ек- оптическая плотность калибровочной пробы, ед.плот.

120-концекнтрация гемоглобина кВ калибровочном растворе, г/л.

Приготовленные разведения фотометрируют. против дистиллированной воды («холостая» проба).

ФОТОМЕТРЫ  ФОТОЭЛЕКТРИЧЕСКИЕ

КФК-3-«ЗОМЗ»

РУКОВОДСТВО  ПО  ЭКСПЛУАТАЦИИ

БШ 2.853.021-02 РЭ

Руководство по эксплуатации предназначено для  изучения устройства фотометров   фотоэлектрических    КФК-3-«ЗОМЗ», выпускаемых в трех модификациях: фотометр фотоэлектрический КФК-3-01-«ЗОМЗ» (выпускаемый в исполнениях БШ2.853.021-02.1 и БШ2.853.021-02.2), фотометр фотоэлектрический КФК-3-02-«ЗОМЗ» с термостатируемым кюветным отделением, фотометр фотоэлектрический  КФК-3-03-«ЗОМЗ» с проточной кюветой с насосом и внешним термостатом для подготовки проб, с  целью  обеспечения их  правильной эксплуатации.

Примечание – В связи с постоянным усовершенствованием фотометров текст руководства по эксплуатации и рисунки могут в отдельных деталях отличаться от выполненной конструкции.

1.1      Назначение  фотометров

Фотометры фотоэлектрические КФК-3-«ЗОМЗ» (в дальнейшем – фотометры), предназначены для измерения спектрального коэффициента направленного пропускания (в дальнейшем – СКНП), оптической плотности и скорости изменения оптической плотности прозрачных жидкостных растворов, а также для определения концентрации веществ в растворах после предварительной градуировки фотометров потребителем.

Фотометры предназначены для оснащения клинико-диагностических лабораторий лечебно-профилактических учреждений, поликлиник и других медицинских учреждений  для проведения биохимических исследований плазмы крови при диагностике заболеваний, профилактических осмотрах, оценке эффективности лечебных мероприятий, для применения в сельском хозяйстве, на предприятиях водоснабжения, в металлургической, химической, пищевой промышленности и других отраслях

По условиям эксплуатации в части воздействия климатических факторов внешней среды фотометры относятся к исполнению УХЛ категории 4.2 по ГОСТ 15150-69.

1.2  Основные  технические  данные

1.2.1Спектральный диапазон ……………………320 – 900 нм.

Диапазон показаний длин волн ………………….315 – 990 нм

В качестве диспергирующего элемента применен монохроматор на дифракционной решетке.

1.2.2 Выделяемый спектральный интервал……..5 – 7 нм

1.2.3 Диапазон измерений:

– СКНП…………………………………………………..1 – 99 %

– оптической плотности ………………………………..0,004 – 2 Б

1.2.4 Диапазон показаний:

– СКНП …………… ……………………………………0,1 – 120 %

– оптической плотности ………………………………0 -3 Б

– концентрации ………………….0,001 – 9999 единиц концентрации

1.2.5 Пределы допускаемого значения основной абсолютной погрешности при измерении СКНП ………………………….±0,5 %

2

Отклонение от линейности при измерении оптической плотности:

– в диапазоне от 0,004 до 0,200 Б………………….. ±0,004 Б(абс.);

– в диапазоне от 0,201 до 2,000 Б……………………±6 %(отн.)

1.2.6 Пределы допускаемой основной абсолютной погрешности установки длины волны ………………………………………±3 нм

1.2.7 Пределы допускаемого значения среднего квадратического отклонения случайной составляющей основной абсолютной погрешности:

– при измерении СКНП ……………………………..±0,15 %;

– при измерении оптической плотности ……………±0,003 Б.

1.2.8 Время установления рабочего режима, не более…30 мин

1.2.9 Изменение показаний фотометра:

– при измерении СКНП, не более …………………±0,4 % за 5 минут;

– при измерении оптической плотности, не более…±0,008 Б за 1 час.

1.2.10 Рабочая длина кювет ……………..1, 3, 5, 10, 20, 30, 50, 100 мм

1.2.11 Микропроцессорная система обеспечивает выполнение задач согласно таблице 1.1.

Таблица 1.1