Кровь на рнга норма

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) относится к серологическим методам исследования. Серология – наука об изучении различных свойств плазмы крови. Если точнее говорить, то серология изучает взаимодействие антител, находящихся в организме человека, с определёнными антигенами. В медицинской клинико-лабораторной диагностики серология является одним из разделов иммунологии.

Основными серологическими методами исследования являются различные реакции. Такие реакции, как правило, делятся на прямые и косвенные. В свою очередь прямые бывают двухкомпонентными – это агглютинация, гемолитическая агглютинация или реакция преципитации. А косвенные реакции в основном трехкомпонентные, к ним относятся реакции торможения гемолитической агглютинации и нейтрализации (микроорганизма и вируса).

Агглютинация представляет собой слипание и выпадения в осадок клеток, имеющих определенный антиген, который вступил во взаимодействие с таким же антигеном. Реакция преципитации помогает определить в организме или исследуемом материале неизвестный антиген путем добавления определенного антитела. В результате при положительном результате выпадает осадок в виде хлопьев.

Такие исследования проводят для определения инфекционного или бактериологического заболевания. К сожалению, такие методы не являются однозначными в диагностики данных групп заболеваний. Поэтому при постановке диагнозов следует учитывать анамнез пациента, клинические проявления заболевания, а также назначать дополнительные подтверждающие методы исследования.

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) – этот метод специфичен для определения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями (например, сальмонеллезов или дизентерии), риккетсиями, простейшими или грибами. Также этот метод эффективен в отношении диагностирования сифилиса.

Принцип метода РНГА

При постановке реакции используются эритроциты (может использоваться латекс), которые имеют на своей стенке определенные антигены. К планшету с эритроцитами добавляется исследуемый материал. Если в нем имеются специфические антитела или белки определяемого возбудителя заболевания, то они вступают в связь с антигенами, слипаются и образуют видимый осадок.

Стандартный набор в основном содержит пустой планшет, эритроциты баранов, которые и имеют чувствительность к антигену выявляемого заболевания. Также в наборе присутствуют эритроциты, не имеющие антигенов. Контроли – положительный и отрицательный и стандартный реактив для разведения сывороток.

Самое главное в постановке реакции – это строгое соблюдение всех этапов. Для начала берут пустой планшет для РНГА, в лунки раскапываются последовательно заранее разведенные исследуемые образцы. В первую и последнюю лунки капают контроли. К сывороткам добавляют эритроциты со специфическими антигенами. Инкубируют планшет 2 часа.

Далее описывают визуальный результат. Он учитывается в крестах. Реакция считается верной только тогда, когда контроли прошли реакцию. Соответственно, в лунке с положительным контролем эритроциты располагаются по всему дну в виде хлопьев («зонтик»). В случае с отрицательным контролем на дне лунки выпадает маленькое четкое кольцо из эритроцитов («пуговка»).

Учет результатов

Результат учитывается по интенсивности осадка из эритроцитов в лунке.

«-» отрицательный результат, как отрицательный контрольный образец, в виде плотного кольца на дне без какой-либо зернистости.
«+» слабая интенсивность реакции, кольцо на дне в виде «пуговки», но при этом видны отдельные отложения эритроцитов. Результат описывается как «сомнительный». Обязательная пересдачи крови через 2 недели.
«++» средняя интенсивность прошедшей реакции. Образовавшееся кольцо на дне лунки достаточно широкое с просветом в центре. Результат трактуется как слабо положительный.
«+++» интенсивная реакция. В лунке эритроциты занимают всю поверхность, выпадают в виде «зонтиков». То есть с тонким кольцом по периферии. Результат оценивается как положительный.
«++++» резкая интенсивность реакции. Вся лунка равномерно заполнена зернистыми выпадениями эритроцитов, иногда может быть в виде «зонтика». Также результат считается положительным или резко положительным.

Реакция может быть ложноположительной при протекании в организме человека тяжелых аутоиммунных заболеваний. Поэтому, если при пересдаче анализа реакция дает перекрест и результат отчитывается как ложноположительный, незамедлительно нужно обратиться к врачу для выяснения причины данной реакции.

Иногда этот метод принимают для подтверждения другого метода диагностики, основанного также на связывании антиген-антитело, называемого иммуноферментный анализ.

Подготовка к анализу

Чтобы не допустить ложноположительных результатов, к анализу нужно подготовиться заранее. Забор крови на данный анализ производится строго натощак и без употребления утром какой-либо жидкости. Нужно воздержаться от курения, хотя бы за час до сдачи анализа. Алкогольные напитки стоит исключить из рациона как минимум за сутки до анализа. Кровь на РНГА забирается из вены.

В настоящее время реакцию непрямой (пассивной) гемолитической агглютинации очень широко используют в медицинской лабораторной диагностике. Эта методика впервые была протестирована еще в 1965 году. И до сегодняшнего дня очень востребована. Она дает возможность не только определить, протекает ли в данный момент инфекционное заболевание у человека, но и на какой стадии оно находится.

Используют РНГА чаще всего для скрининга населения на наличие инфекционных заболеваний и для подтверждения положительных результатов, например, на сифилис. Основано это на том, что тест считается достаточно чувствительным и эффективным. Но при этом реакция проста в постановке и не требует много времени, результат можно получить уже в день сдачи крови.

Cергеева Екатерина Андреевна

Источник

Каждый из нас на протяжении своей жизни хотя бы раз сталкивался с инфекционными заболеваниями. Все они вызываются большим количеством патогенных агентов: бактериями, вирусами, простейшими и грибами. Микробиология насчитывает миллионы микроорганизмов, способных привести к развитию инфекции у человека.

Серологические исследования Некоторые из них являются условно-патогенными, другие — облигатными возбудителями болезней. В медицине существует огромное количество лабораторных методов, позволяющих выявить патоген. Каждый из них обладает своими недостатками и преимуществами. Большое значение имеет чувствительность и точность метода.

Самыми часто используемыми методами являются генно-молекулярные и серологические исследования. Пациенты, получая направление на молекулярные и серологические исследования, задумываются, что это такое и считают, что это очень сложное обследование. На самом деле процесс сдачи анализа не превышает 5 минут, а информативность колеблется в пределах 95-100%.

Что такое серологический анализ

Серологические реакции являются важным инструментом для выявления причины инфекционного заболевания. Серодиагностика — специфический анализ крови, который основан на взаимодействии антигенов и антител в сыворотке.

Антитела представляют собой белковые молекулы, образующиеся в организме человека через несколько дней после контакта с патогеном. Они являются строго специфичными для каждой инфекции и вырабатываются для уничтожения возбудителя. Распознавание этих белковых фракций позволяет быстро выявить и микроорганизм, к которому они образовались. Антигены же представляют собой чужеродные белки, содержащиеся в бактериях. Синтезированное антитело находит в крови антиген и прочно связывается с ним, не позволяя ему губительно влиять на организм.

Реакция связывания этих двух белков с образованием единого комплекса лежит в основе применения всех серологических реакций. Для поиска антител используются особые стандартные растворы с антигенами возбудителей (диагностикумы), которые добавляют к исследуемой крови. Серодиагностика определяет все белковые маркеры инфекций, а последующая расшифровка результатов дает информацию еще и о продолжительности заболевания. Эта особенность характерна только для серологического анализа, что делает его методом выбора во многих клинических ситуациях.

Преимущества и недостатки

Серологические исследования

Серологический метод лабораторной диагностики имеет большое количество плюсов, что глубоко внедрило его в практическое использование во всех отраслях медицины: гинекологию, урологию, инфектологию и венерологию.

Серодиагностика является общедоступным анализом, позволяющим быстро получить точные результаты. Она не требует длительной подготовки к забору материала и легко переносится всеми пациентами. Для забора венозной крови от пациента требуется соблюдать диету лишь в течение 48 часов. Серологические реакции также обладают высокой специфичностью (100%), чувствительностью (95%) и точностью (90-95%).

Но этот анализ венозной крови требует больших затрат дорогих диагностикумов, что влияет и на его себестоимость. Некоторые возбудители обладают слабой иммуногенностью, то есть в организме к ним вырабатывается мало антител, поэтому проведение серодиагностики невозможно. Кроме того, метод значительно реже используется при вирусных инфекционных патологиях, уступая по эффективности ПЦР-анализу.

В каких случаях назначают

Серологическое лабораторное исследование крови назначают для диагностики инфекционных заболеваний: бактериальных, вирусных, протозойных, паразитарных и микст-инфекций. Наиболее широко выявление антител используется в акушерско-гинекологической и урологической практике. В урологии это лабораторное исследование используется при уретритах неясной этиологии, баланитах и баланопоститах. В гинекологии направляют на обследование при любом воспалительном процессе репродуктивной системы (вульвовагиниты, кольпиты, цервициты и эндометриты).

В акушерстве каждой беременной женщине назначают анализ венозной крови с целью исключения заболеваний, опасных для плода. Эти инфекции носят название «TORCH-комплекс» и определяются с помощью серологических реакций. ТОРЧ-инфекции вызывают у развивающегося плода пороки развития, часто несовместимые с жизнью. Именно поэтому ранняя и точная диагностика этих инфекций является основной целью акушера-гинеколога. Серология проводится и при подозрении на мужское или женское бесплодие по причине инфекционной патологии.

Если врач подозревает у пациента наличие инфекции, передающейся половым путем, то требуется прохождение комплексного обследования, включающего серодиагностику. Если у одного из партнеров найдено заболевание из группы ИППП, то второму партнеру необходимо пройти исследование, даже если у него нет клинических симптомов.

Методы диагностики

Серологические исследования Серологические реакции включают в себя несколько разновидностей. Все они основаны на поиске антител (иммуноглобулинов) и антигенов, но проводятся разными способами и имеют разные диагностические критерии постановки диагноза. Серологические методы лабораторного исследования в зависимости от методики проведения делятся на простые и сложные. Классификация основана на том, сколько белков необходимо найти: простые реакции определяют только антитела или антигены, а сложные — комплексы «антиген + иммуноглобулин». Сложный метод исследования более предпочтителен, потому что чувствительность анализа значительно выше.

Чаще всего в лабораториях серологическая диагностика представлена следующими иммунохимическими серореакциями:

реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
иммуноферментный анализ (ИФА);
реакция непрямой гемагглютинации (РНГА);
реакция связывания комплемента (РСК).

Эти виды исследования относятся к сложным серореакциям и обладают значительными преимуществами перед остальными. Они проводятся крайне быстро, имеют высокую точность диагностики болезней и не требуют длительной подготовки: от пациента требуется только сдать анализ венозной крови.

Иммунофлюоресцентная реакция РИФ

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ), или анализ Кунса – метод экспресс-обнаружения антигенов патогенного агента в биоматериале пациента. Для проведения РИФ используется специальный краситель – флюорохром, способный светиться под люминесцентным микробиологическим микроскопом. Флюорохром добавляют в диагностическую сыворотку со строгим соблюдением концентрации, иначе реакция может показать ложные результаты. Иммунофлюоресцентная реакция бывает двух видов: прямая и непрямая.

Прямая реакция Кунса выявляет только антигены возбудителя. Для их определения в биоматериал добавляют диагностическую сыворотку, состоящую из антител и флюорохрома. Антигены, находящиеся на клеточной стенке возбудителя, связываются с окрашенными антителами. Врач лабораторной реакции рассматривает предметное стекло под микроскопом и видит ярко-зеленое свечение. Типичным примером такой реакции является выявление хламидий, контрастированных синькой Эванса.

Непрямая РИФ (РНИФ) определяет антигенно-антительные комплексы. Для этого врач последовательно добавляет в образец сначала немеченые иммуноглобулины, чтобы они связались с антигенами. Затем к образованным иммунным комплексам добавляется новая сыворотка, содержащая уже меченные красителем антитела к недавно образовавшимся комплексам. Наиболее часто прямая реакция используется для диагностики вирусных болезней.

Единственным недостатком данных реакций является некоторая степень субъективизма при учете результатов: одна и та же интенсивность свечения иногда расценивается врачами по-разному, что в итоге приводит к ложным данным лабораторного обследования.

Реакция непрямой гемагглютинации РНГА

Серологические исследования РНГА — анализ, направленный на выявление иммуноглобулинов или антигенов в различных биологических жидкостях. Реакция непрямой гемагглютинации является одним из самых точных методов для определения титра иммуноглобулинов, что позволяет судить о стадии инфекционного процесса. Нарастание титра иммуноглобулинов в 4 раза в двух анализах крови, взятых с промежутком в несколько недель, говорит об остром инфекционном процессе бактериальной или вирусной этиологии. РНГА дает возможность лечащему врачу назначить правильную медикаментозную терапию с учетом стадии заболевания. Широкое распространение исследование получило для выявления ИППП, менингококковой инфекции, ботулинический токсина (ботулотоксина) и большинства вирусных инфекций.

Для проведения исследования используются красные клетки крови – эритроциты, на поверхности которых расположены антигены или антитела. Сыворотка носит название антигенного или антительного эритроцитарного диагностикума. Диагностикум добавляют к исследуемой крови, затем наблюдают за реакцией. При присоединении этих эритроцитов к антигенам или иммуноглобулином крови образуются комплексы, а красные кровяные клетки начинают выпадать в осадок. При отрицательном анализе эритроциты скапливаются в виде небольшого пятна в виде пуговицы. Если же на дне пробирки или планшетки образовался осадок с фестончатыми краями в виде зонтика, то реакция считается положительной.

Сложность в проведении этого серологического теста заключается в необходимости точного приготовления эритроцитарного диагностикума и строгого соблюдения концентраций используемых компонентов.

Иммуноферментный анализ ИФА

Метод иммуноферментного анализа считается самой точной, специфичной и чувствительной серореакцией. Учет результатов ИФА автоматизирован, а человеческий фактор и субъективная оценка данных исключена. Точность результата достигает 98%, а при повторном исследовании – 100%. ИФА используется для диагностики инфекций, передающихся половым путем, ВИЧ, вирусных гепатитов A, B, C, D, E, TORCH-инфекций и множества других заболеваний.

Существует более десяти модификаций данного анализа (прямой, непрямой, неконкурентный, твердофазный и т. д.), но все они имеют особые, характерные особенности диагностики, но схожий принцип проведения. Фазы иммуноферментных серологических реакций включают в себя создание комплекса антиген-антитело, к которому добавляют ферменты, играющие роль метки. Затем исследуемый материал располагают на специальный планшет, помещают в автоматизированную систему и начинают поиск комплексов, меченых радионуклидами. Анализатор выявляет святящиеся метки, измеряет оптическую плотность и степень свечения иммунных клеток, а затем выдает результат анализа.

Как подготовиться к сдаче

Серологические исследования Анализ не требует особой подготовки, все правила соответствуют обычной сдаче венозной крови.

От пациента требуется строго соблюдать ряд простых правил:

за 72 часа до манипуляции следует соблюдать диету: нельзя употреблять в пищу жирное, жареное, соленое и острое, алкогольные напитки также запрещены;
рекомендуется поддерживать оптимальный водный баланс в организме, а для этого необходимо пить не менее двух литров чистой питьевой воды;
анализ венозной крови проводится на голодный желудок, поэтому минимум за 10 часов до манипуляции нельзя есть, пить чай, кофе и другие напитки;
за 4 часа до процедуры запрещается курить.

Если по состоянию здоровья пациент обязан пить какие-либо таблетки, необходимо заранее предупредить об этом лечащего врача. За час до сдачи материала рекомендуется избегать физических нагрузок, а перед тем, как зайти в процедурный кабинет, следует присесть и отдохнуть 10-15 минут.

Процесс сдачи анализа

Забор венозной крови на серологическое исследование осуществляется в первой половине дня. Пациенту следует заблаговременно приехать в лабораторию, взяв с собой необходимые документы (паспорт и направление на анализ).

Пациенту предлагают пройти в процедурный кабинет и удобно расположиться на кресле. Взятие крови осуществляют из вены, которая находится в области локтевого сгиба, поэтому необходимо освободить предплечье и локтевую зону от вещей. На плечо накладывается жгут, а под руку подкладывают подушку. Медицинская сестра надевает одноразовые стерильные перчатки и обрабатывает место пункции ватным тампоном, смоченным в дезинфицирующем средстве.

Алгоритм проведения венозной инъекции включает в себя нагнетание крови в вену, для этого пациента просят несколько раз сжать и разжать кулак. Сосуд при этом лучше визуализируется и прощупывается, что облегчает забор материала. Затем медсестра вводит иглу шприца в вену, берет 10 миллилитров крови и наклеивает на место инъекции бактерицидный пластырь. Чтобы избежать образование гематомы, после манипуляции следует согнуть руку в локте на 15-20 минут.

Расшифровка результатов

Для правильной постановки диагноза серологические реакции должны расшифровываться квалифицированным специалистом. Выявление антител еще не говорит о наличии заболевания, в некоторых случаях циркуляция иммуноглобулинов в крови — это норма. Так, в нашем организме постоянно присутствуют антитела IgM от кори, ветряной оспы и т.д. Они являются маркером перенесенной инфекции и защищают нас от повторного инфицирования. Поэтому учет результатов анализа крови и расшифровка серологического исследования должны проводиться индивидуально для каждого пациента.

Однако существуют определенные серологические маркеры инфекционных заболеваний:

Выявление в крови иммуноглобулинов класса A к вирусу или бактерии свидетельствует об остром инфекционном процессе, длящемся не более 14-ти дней.
Если в крови найдены иммуноглобулины класса M, то требуется расширенная лабораторная диагностика, потому что эти антитела – маркер как уже перенесенной болезни, так и длительного инфицирования.
Нарастание титра антител в 4 и более раз в двух последовательно взятых анализах крови говорит о наличии инфекционного заболевания.
Выявление любых антигенов патогена свидетельствует о том, что возбудитель присутствует в организме.

В случае неясной диагностической картины проводятся повторные серологические тесты или обследование дополняется другими методами исследования (ПЦР, бакпосев и т.д.)

Что делать при обнаружении венерических болезней

Если серологическая диагностика подтвердила наличие ИППП, то необходимо незамедлительно переходить к этапу лечения, чтобы избежать осложнений и хронизации процесса. Пациенту следует повторно записаться на консультацию к лечащему врачу. Он назначит этиотропное комплексное лечение и будет динамически наблюдать за состоянием пациента во время медикаментозной терапии.

Тайтл: Серологические исследования: что это такое, анализ крови на определение инфекций, как сдавать и расшифровать, методики реакций для определения заболеваний

Дескрипшен: Что такое серологические исследований и для выявления каких заболеваний они используются. Как проходит анализ крови на определение инфекция. Как подготовиться, сдавать и расшифровать результат после получения. Методики проведения реакций для определения заболевания.

Источник