Норма билирубина в крови крс
- Авторы
- Резюме
- Файлы
- Ключевые слова
- Литература
Куликова Н.А.
1
1 Оренбургский государственный университет
Целью данного исследования явилось выявление закономерности изменения содержания билирубина в крови крупного рогатого скота в зависимости от возраста. В качестве материала исследования использовалась кровь крупного рогатого скота различного возраста. Образцы крови подвергались колориметрическим исследованиям. Данные исследования были основаны на взаимодействии билирубина с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием азопигментов. По результатам исследования было выявлено, что образцы крови крупнорогатого скота отличались по степени окраски, которая варьировалась от бледно-розового, до ярко оранжевого. Интенсивность окраски свидетельствует о количестве биллирубина в испытуемых образцах крови, в норме 3,4-17,1 мкмоль/литр. но, в зависимости от возраста, данный показатель уменьшается в пределах физиологической нормы. Таким образом, прослеживается тенденция к неравномерному содержанию билирубина в крови исследованных животных в зависимости от возраста.
билирубин в крови КРС
свободный и связанный билирубин
нормы содержания билирубина
зависимость билирубина от возраста
1. Гидранович В.И. Биохимия: учеб. пособие / В.И. Гидранович, А.В. Гидранович. – Минск: Тетра-Системс, 2012. – 528 с.
2. Комов В.П. Биохимия: учебник / В.П. Комов, В.Н. Шведова. – Москва: Дрофа, 2008. – 640 с.
3. Соколова О.Я. Биохимия сельскохозяйственных животных: учеб. пособие / О.Я. Соколова, М.В. Фомина, Е.В. Бибарцева. – Оренбург: Университет, 2014. – 239 с.
4. Барышева Е.С. Биохимия крови: учеб. пособие / Е.С. Барышева, К.М. Бурова. – Оренбург: Университет, 2014. – 141 с.
В организме, как человека, так и животных постоянно происходят разнообразные процессы, связанные с синтезом одних веществ, распадом других и множественные превращения одних соединений в другие. Примерами таких процессов могут служить синтез гормонов, ферментов, непрерывный распад и синтез белковых молекул, азотистый обмен, синтез и распад гема и многое другое.
Большой интерес в плане изучения данного вопроса представляет образование пигмента билирубина.
Билирубин – это красящее вещество, желточный пигмент, которое находится в крови и, впоследствии, выводится с желчью. Образуется данный пигмент в результате распада гемоглобина и миоглобина – белков крови, которые в больших количествах содержатся в эритроцитах.
Молекула билирубина состоит из четырёх пиррольных простых кольц, которые соединены линейно друг с другом. Определенная молекулярная масса билирубина приравнена 548,68. Согласно физическим свойствам обычный чистый билирубин можно охарактеризовать как кристаллическое вещество, всегда трудно растворимое в воде, глицерине, эфире, а также слабо растворимое в спирте, при этом немного лучше – в хлорбензоле, хлороформе и различных разведенных растворах щелочей.
В организме человека и животных билирубин образуется под действием фермента биливердинредуктазы из биливердина, зелёного пигмента, который также является продуктом распада гема. Будучи оксидирован, билирубин может превращаться обратно в биливердин. Этот цикл реакций стал причиной гипотезы, что билирубин является главным клеточным антиоксидантом
Существует несколько форм билирубина: свободный (непрямой) и связанный (прямой). Так, при разрушении постаревших эритроцитов в селезенке, костном мозге и печени – так называемых кроветворных органах, выделяется свободный, или непрямой билирубин.
Непрямой билирубин связывается в крови с альбуминами и транспортируется в печень, где под воздействием ферментов преобразуется в соединение с глюкуроновой кислотой – билирубин прямой, или связанный. Прямой билирубин и незначительное количество непрямого (вместе они составляют билирубин общий) с желчью выводятся в кишечник, где и утилизируются – под воздействием микрофлоры кишечника данные пигменты превращаются в новые химические соединения и выводятся из организма с калом и мочой [1 с. 53].
При повышении концентрации билирубина в сыворотке крови свыше 27 – 34 мкмоль/л появляется желтуха (лёгкая форма – до 85 мкмоль/л, среднетяжёлая – 86 – 169 мкмоль/л, тяжёлая форма – свыше 170 мкмоль/л). У новорожденных наблюдается физиологическая желтуха в первую неделю жизни (с повышением общего билирубина крови за счёт фракции непрямого билирубина), т.к. отмечается усиленное разрушение эритроцитов, а билирубин-конъюгирующая система несовершенна. Гипербилирубинемия может быть результатом повышенной продукции билирубина вследствие повышенного гемолиза эритроцитов (гемолитические желтухи), пониженной способности к метаболизму и транспорту против градиента в желчь билирубина гепатоцитами (паренхиматозные желтухи), а также следствием механических затруднений желчевыделения (обтурационные – застойные, механические, холестатические желтухи).
Для дифференциальной диагностики желтух используют комплекс пигментных тестов – определение концентрации в крови общего, прямого билирубина (и оценку по их разности уровня непрямого билирубина), а также определение концентрации в моче уробилиногена и билирубина. Билирубин показывает, как работает печень. Повышение уровня общего билирубина – симптом желтухи, осложнений желчно-каменной болезни, избыточного разрушения эритроцитов.
Важно знать, что непрямой билирубин является сильнейшим тканевым ядом, который нерастворим в воде, и поэтому не может выводиться с желчью и мочой. Наибольшее токсическое воздействие этот яд оказывает на клетки центральной нервной системы, в том числе и головной мозг. Прямой билирубин имеет менее выраженные токсические свойства, он способен растворяться в воде и легко выводится из организма.
Поэтому важно следить за тем, чтобы уровень билирубина в крови не повышался. Обычно в лаборатории определяют общий билирубин, с нормой содержания в крови 2,4-20,5 мкмоль/литр; у новорожденного в течение первых десяти суток жизни билирубин в крови колеблется от 22 мкмоль/л до 120 мкмоль/литр. [2, с. 87].
Цель исследования: Выявить содержание билирубина в крови в зависимости от возраста крупного рогатого скота.
Материалы исследования: в качестве материала исследования использовалась кровь крупного рогатого скота. Забор образцов проводился у животных различных возрастных групп (от 3 месяцев до 10 лет) с использованием вакуум-содержащих систем из яремной вены в верхней трети шеи.
Полученные образцы крови исследовались согласно методу Ван Ден Берга и колориметрическим исследованиям. Метод Ван Ден Берга основан на том, что при воздействии диазореактива Эрлиха на сыворотку крови, содержащую билирубин, образуется азобилирубин (диазосоль), придающий сыворотке розовый цвет. С этой целью к 2 мл испытуемой сыворотки добавляют 4 мл 96 процентного спирта для осаждения белков и смесь центрифугируют в течение 20 минут. К 1 миллилитру прозрачной надосадочной жидкости добавляют 0,5 миллилитров спирта для растворения жирных кислот и 0,25 мллилитров диазореактива. При положительной реакции появляется интенсивное розовое окрашивание. Колличество билирубина определяют колориметрически [4, с. 34]. При этом связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный – только после добавления акселератора (кофеин, метанол, мочевина, уксусная кислота). Последний освобождает билирубин из комплекса с белками и тем самым ускоряет реакцию азосочетания. Это наиболее важная в практическом отношении реакция ароматических диазосоединений. Образовавшийся азокраситель ведет себя как кислотно-основной индикатор с несколькими цветными переходами, в сильнокислой среде он окрашен в фиолетовый цвет, в слабощелочной и слабокислой – в розовый, в сильнощелочной среде – в синий или зеленый цвета [4, с. 34].
По результатам исследования были получены следующие данные – образцы крови крупнорогатого скота отличались по степени окраски, которая варьировалась от бледно-розового, до ярко оранжевого. Интенсивность окраски свидетельствует о количестве биллирубина в испытуемых образцах крови, в норме 3,4-17,1 мкмоль/литр, но, в зависимости от возраста, данный показатель уменьшается в пределах физиологической нормы. Так, у трёх месячных телят средние значения билирубина составляли 16,1 мкмоль/литр; у годовалых телят данный показатель составил 10,1 мкмоль/литр, данное значение встречалось у всех обследованных животных; у КРС в возрасте 3 года – 4,7 мкмоль/литр; 5 лет – 3,9 мкмоль/литр; 7 лет – 3,2 мкмоль/литр; в возрасте 10 лет у крупного рогатого скота наблюдается критические значения билирубина в крови – 2,5 мкмоль/литр.
Таким образом, прослеживается тенденция к неравномерному содержанию билирубина в крови исследованных животных в зависимости от возраста.
Полученные результаты, свидетельствуют о том, что в крови уменьшается концентрация пигмента, который образуется при распаде гемоглобина, содержащегося в эритроцитах. Другими словами, значение содержания билирубина на нижней границе может свидетельствовать о том, что в крови животного снизился уровень гемоглобина, из-за чего ткани организма могут получать недостаточное количество кислорода.
Низкие значения содержания билирубина в крови не является показателем патологического процесса, не имеет клинических проявлений и легко может быть восполнен при нормализации режима питания.
Библиографическая ссылка
Куликова Н.А. ИССЛЕДОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИЛИРУБИНА В КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА // Международный студенческий научный вестник. – 2017. – № 4-5.;
URL: https://eduherald.ru/ru/article/view?id=17460 (дата обращения: 16.08.2020).
Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)
Билирубин образуется из порфириновой части гема при распаде гемоглобина, миоглобина и цитохромов в клетках ретикулоэндотелиальной системы (РЭС) селезенки, печени и костного мозга.
После выхода из клеток РЭС, билирубин (неконъюгированный, свободный, непрямой) связывается с альбумином нековалентной связью и транспортируется в печень. Неконъюгированный билирубин нерастворим в воде и за счет своих липофильных свойств обладает высокой токсичностью, имеет тропизм к клеткам головного мозга (вызывает билирубиновую энцефалопатию). Превращение билирубина в растворимую форму происходит в печени и состоит из трех этапов: поглощения билирубина гепатоцитами, процесса конъюгации и секреции в желчные канальцы.
На поверхности гепатоцитов неконъюгированный билирубин отсоединяется от альбумина и захватывается клетками печени при участии специфических белков-переносчиков. Система поглощения клетками печени билирубина обладает большой емкостью и лимитируется только дальнейшими метаболическими превращениями билирубина. В гепатоцитах билирубин переходит в водорастворимую форму путем последовательного присоединения (конъюгации) двух молекул глюкуроновой кислоты. Присоединение одной молекулы глюкуроновой кислоты к билирубину дает билирубинмоноглюкоронид (который также может образовываться в кишечнике и почках). При присоединении второй молекулы глюкуроновой кислоты образуется билирубиндиглюкоронид (реакция происходит только в печени). Образовавшийся конъюгированный (прямой) водорастворимый билирубин с помощью механизма активного транспорта секретируется в желчные канальцы. Небольшое количество глюкуронидов может транспортироваться обратно в кровь, поэтому в крови возможно присутствие как конъюгированной, так и неконъюгированной фракции билирубина. Конъюгированный (прямой) билирубин с желчью поступает в тонкий кишечник. Под действием кишечных бактерий прямой билирубин превращается в уробилиноген и реабсорбируется кишечником. Большая часть реабсорбированного уробилиногена попадает обратно в печень и ресекретируется в желчь путем энтерогепатической циркуляции. Меньшая часть уробилиногена экскретируется почками. Уробилиноген, оставшийся в кишечнике, окисляется до стеркобилина и выводится из организма.
Общий билирубин представляет собой комбинацию конъюгированной (прямой) и неконъюгированной (свободной, непрямой) фракций билирубина. Свободный (неконъюгированный) билирубин традиционно является расчетным показателем и представляет собой разницу между значениями общего и прямого (конъюгированного) билирубина.
Повышение в крови уровня билирубина (конъюгированного или неконъюгированного) окрашивает ткани в желтый цвет (желтуха). Билирубинемия чаще всего возникает в результате:
- усиленного разрушения эритроцитов (вне- или внутрисосудистый гемолиз, распад эритроцитов в результате кровоизлияния);
- тяжелых гепатоцеллюлярных повреждений и угнетения конъюгационных или секреторных механизмов печени;
- снижения секреции билирубина и нарушения выведения желчи в кишечник (холестаз).
Поэтому измерение уровня общего билирубина в сыворотке крови проводится при выявлении желтухи, билирубинурии (при любых значениях у кошек или при значительной концентрации у собак) или при подозрении на заболевания печени.
Иктеричность склер наблюдается, когда уровень билирубина в крови превышает 51 мкмоль/л — 68 мкмоль/л (от 3 мг/дл до 4 мг/дл). Появление иктеричности кожных покровов возникает, если уровень билирубина в крови превышает 60 ммоль/л. Ярко-желтый цвет плазмы можно обнаружить, когда содержание билирубина больше 26 мкмоль/л — 34 мкмоль/л (1,5 мг/дл — 2 мг/дл).
Избыток неконъюгированного билирубина в плазме крови связывается с альбумином и не проходит через фильтрационный барьер почечных клубочков, поэтому билирубинурия не наблюдается.
При повышении в крови конъюгированного билирубина (например, при патологии гепатобилиарной системы или обструкции желчных протоков) он связывается с сывороточными альбуминами ковалентной и нековалентной связями. Ковалентно связанный с альбумином билирубин (дельта-билирубин, или билипротеин) выводится из организма медленнее других форм билирубина, период его полувыведения примерно равен скорости полувыведения альбумина — 8–20 дней, при этом у кошек стойкая гипербилирубинемия и желтуха сохраняются дольше. Дельта-билирубин является составной частью общего билирубина сыворотки крови. Таким образом, повышенная концентрация общего билирубина иногда может вводить в заблуждение, поскольку билипротеин может сохраняться в сыворотке крови животных в течение нескольких недель после устранения причины холестаза. При нарушении оттока желчи в кишечник в крови увеличивается концентрация конъюгированного билирубина, а поскольку он хорошо растворим, то при длительном холестазе менее прочно связанный с альбумином билирубин может проникать в канальцевый ультрафильтрат, и в моче выявляется прямой билирубин.
У кошек не вызванная гемолизом желтуха, как правило, указывает на первичное заболевание печени. У собак и кошек увеличение концентрации общего билирубина в крови может быть вызвано вторичными заболеваниями печени. Некоторые бактериальные эндотоксины и медиаторы ответа острой фазы подавляют мембранный механизм секреции билирубина в желчные канальцы и вызывают сепсис-ассоциированный холестаз.
Концентрация билирубина в плазме не соотносится со степенью клинических проявлений желтухи. Предполагают, что прямой билирубин имеет большее сродство с соединительной тканью, чем неконъюгированный пигмент, возможно, потому что конъюгированный билирубин менее прочно связывается с альбумином.
Как правило, желтуха у многих животных (особенно у собак) проявляется при тяжелых поражениях печени и не является самостоятельной патологией. Определение одного только билирубина в сыворотке крови не позволяет использовать его в качестве диагностического теста или прогностического признака у животных с заболеваниями печени.
ПРЕАНАЛИТИКА
Для получения более точных результатов животные перед исследованием должны находиться на голодной диете не менее 12 часов. Образец стабилен 1 неделю при температуре хранения +2°С…+8°С; сохраняет стабильность 3 месяца при замораживании -17С…-23С. Липемия и гемолиз могут быть причиной ошибочного завышения величины содержания билирубина. Не подвергать биоматериал воздействию яркого света! Воздействие прямого солнечного света или флуоресцентного освещения может уменьшать содержание билирубина в образце на 50% в час.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.
Единицы измерения лаборатории VET UNION: мкмоль/л.
Референсные значения:
Собаки: <10 мкмоль/л.
Кошки: <10 мкмоль/л.
Хорьки: 1,71–17 мкмоль/л.
Лошадь: 5–51 мкмоль/л.
МРС: 0,7- 6,8 мкмоль/л.
КРС: 0,7–14 мкмоль/л.
Кролик: < 12 мкмоль/л.
Крыса: < 17 мкмоль/л.
Морская свинка: < 17 мкмоль/л.
Мышь: <17 мкмоль/л.
Песчанка: < 17 мкмоль/л.
Хомяк: < 17 мкмоль/л.
Шиншилла: < 17 мкмоль/л.
Тигр: 1,8 — 8,6 мкмоль/л.
Леопард: 1,8 — 8,6 мкмоль/л.
Снижение уровня билирубина может быть обусловлено применением препаратов, вызывающих индукцию печеночных ферментов (например, фенобарбитала). Увеличение билирубина может быть следствием приема лекарственных средств, вызывающих гемолитическую анемию, острую печеночную недостаточность или билиарно-печеночную дисфункцию.
Повышение уровня (гипербилирубинемия):
Увеличение образования билирубина (надпеченочная гипербилирубинемия). Развивается в основном за счет повышения фракции неконъюгированного билирубина.
Разрушение эритроцитов, происходящее вследствие заболеваний (иммуноопосредованной гемолитической анемии, инвазии кровепаразитами, отравления цинком, гипофосфатемии), внутреннего кровотечения или переливания несовместимой крови (гемолитического шока).
Превышение потенциала печеночных клеток к поглощению, конъюгации и/или секреции при повышенной концентрации билирубина.
Снижение способности печеночных клеток к поглощению или конъюгации билирубина гепатоцитами (печеночная гипербилирубинемия). Повышение общего билирубина происходит за счет неконъюгированного и прямого билирубина.
В результате паренхиматозного поражения печени.
Снижение поглощения билирубина гепатоцитами при анорексии или голодании у лошадей. Концентрация общего билирубина у здоровых лошадей может достигать 171 мкмоль/л (10 мг/дл).
Снижение способности гепатоцитов поглощать билирубин при сепсисе.
Холестаз (подпеченочная гипербилирубинемия). Повышение концентрации общего билирубина происходит за счет конъюгированного и неконъюгированного билирубина.
Снижение секреции билирубина в желчные канальцы.
Физическая непроходимость желчных протоков в результате опухолевого заболевания, набухания гепатоцитов при липидозе печени или гепатопатии, вызванной кортикостероидной терапией.
Развитие внепеченочного холестаза при холангите, желчнокаменной болезни, холецистите и панкреатите.
Понижение уровня:
Не имеет клинической значимости.