Норма крови у овец

Любой организм в соответствии с генотипом даже при наличии экстремальных условий обладает способностью сохранять постоянство гомеостаза. Очевидно, поэтому гематологические, биохимические и другие показатели различных систем отличаются стабильностью, подвергаясь под воздействием внешней среда лишь модификационной изменчивости, проявляющейся в незначительных отклонениях от нормы. На гематологические, биохимические и другие показатели существенное влияние оказывает не только физиологическое состояние животного (возраст, беременность, продуктивность), но и условия кормления, содержания, эксплуатации, а также среда обитания. Вместе с тем картина крови сохраняет свои индивидуальные и видовые особенности.
Наиболее научно обоснованным и присущим современному этапу развития биологической пауки, в том числе медицины и ветеринарии, является математический метод установления нормативов, основанный па теории вероятности с использованием исходных материалов, охватывающих результаты исследований больших групп разного возраста, пола, продуктивности здоровых животных, находящихся в различных климатических зонах.
При изучении особенностей вариационного распределения гематологических показателей было установлено, что для большинства из ниx характерно распределение, близкое к нормативному. Лишь в распределении эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, ретикулоцитов и СОЭ имеется некоторая асимметрия. Для гематологических показателей, как уже принято в биологических исследованиях, нормативы должны иметь уровень достоверности не менее 0,05, т. е. норма — 95% здоровых животных и только в 5% случаев возможны отклонения, причины которых не известны. К сожалению, эти положения при установлении нормативов выполнены не всегда, так как были получены намного раньше, чем была разработана теория вероятности. Поэтому в предложенных многочисленными авторами нормативах морфологического состава кропи для ратных видов животных представлены только средине значения и их экстремальные отклонения (табл. 2, 3).

Определенные трудности вызывает вопрос о необходимости создания отдельных нормативов в зависимости от географических зон, различающихся природно-экономическими условиями. По-видимому, только в местностях, резко отличающихся, например, по высоте над уровнем моря, средней годовой температуре, разводимому типу скота, целесообразно иметь свои нормативы, что очень важно для изучения краевой патологии. Вместе с тем независимо от условий для объективной оценки результатов исследований необходимо знать особенности нормальной картины крови определенного вида животного.
Лошадь. Данный вид животного имеет гранулоцитарный профиль крови, когда нейтрофилы преобладают над остальными клетками. Специфическая зернистость в эозинофилах является наиболее крупной из аналогичных клеток всех животных. Эритроциты образуют цепочки, как и у человека, так называемые монетные столбики. СОЭ выражена и довольно высокая. Следует отметить, что лошади резко отличаются по показателям красной крови в зависимости от типа. Рысистые лошади (горячие) имеют более высокое содержание в крови эритроцитов и уровень гемоглобина, чем рабочие (холодные). В норме у них в крови присутствуют в незначительных количествах ретикулоциты, число которых увеличивается при различных анемиях.
Крупный рогатый скот. До 1 мес после рождения телята имеют нейтрофильный профиль крови при повышенном содержании палочкоядерных форм нейтрофилов, а в последующее время у крупного рогатого скота преобладают лимфоциты над гранулоцитами. СОЭ не выражена, поэтому обычно методически не исследуется. Среди эритроцитов отмечается анизоцитоз. Ретикулоциты и полихроматофилы в норме и даже при патологии в крови не появляются.
Овца. Данный вид животных имеет наиболее выраженный лимфоцитарный профиль крови с самого рождения. Зрелые нейтрофилы по сравнению с крупным рогатым скотом более сегментированы, число которых составляет обычно 3— 4 фрагмента. Количество эритроцитов по сравнению с крупным рогатым скотом несколько выше, но они намного меньше. Ретикулоциты отсутствуют. В норме анизоцитоз, пойкилоцитоз, СОЭ не выражена.
Коза. У данного вида наиболее высокие показатели красной крови, которые завысят от мест их обитания. Высокогорные козы имеют более высокое содержание в крови эритроцитов и уровень гемоглобина. Эритроциты очень мелкие, ретикулоциты отсутствуют. СОЭ также не выражена.
Свинья. Количество лейкоцитов в крови свиней несколько выше, чем у других видов сельскохозяйственных животных. Лимфоциты являются преобладающими клетками белой крови. Среди нейтрофилов число палочкоядерных форм клеток повышено. Ретикулоциты и полихроматофилы постоянно присутствуют как в норме, так при патологии.
Собака. Как и лошадь, собака имеет нейтрофильный профиль крови. В норме в небольших количествах даже у взрослых особей, встречаются полихроматофилы и ретикулоциты, а иногда эритроциты с тельцами Жоли и даже нормобласты. У данного вида выражены, как и у лошади, породные различия в составе красной крови. Гончие собаки имеют более высокое содержание эритроцитов и уровень гемоглобина.
Кошка. Количество лейкоцитов у данного вида животного колеблется в широких пределах (от 10 до 20 тыс. клеток в 1 мкл крови). Соотношение гранулоцитов и лимфоцитов почти равное. В отличие от других видов млекопитающих у кошек гранулы в эозинофилах расположены густо и часто имеют палочковидную форму неодинаковой величины.
Кролик. Нейтрофилы у кролика содержат очень крупную зернистость напоминающую по размерам и окраске зернистость эозино-филов, и поэтому эти клетки были названы псевдоэозинофилами. В картине красной крови, особенно в молодом возрасте, много полихроматофилов и реттисулоцитов.
Птицы. Количество лейкоцитов у всех видов птиц по сравнению с млекопитающими животными в несколько раз выше и колеблется в широких пределах (от 20 до 40 тыс. в 1 мкл крови). Профиль крови обычно лимфоцитарный. Зернистость в нейтрофилах, которая, как и у кролика, называется псевдоэозинофилами, в эозинофилах довольно сходная и представлена многочисленными эозинофильными гранулами различной величины и формы. Однако в эозинофилах гранулы обычно круглые и реже палочковидные, у псевдоэозинофилов, наоборот, гранулы, как правило, палочковидные с заострением на концах. Эритроциты у всех птиц содержат ядро и имеют эллипсовидную форму. Нередко встречаются полихромные эритроциты и клетки с витальной зернистостью. Тромбоциты также содержат ядро, т. е. являются настоящими клетками, а не пластинками, как у млекопитающих. Тромбоцита у птиц — самые мелкие клетки крови, приближающиеся по размеру к малым лимфоцитам.
Причины различий в морфологическом составе крови у различных видов животных не вполне ясны, но, вероятно, обусловлены особенностями обмена веществ. В практическом отношении важно значь, что животные с различным профилем крови (лимфоцитарный, нейтрофильный) несколько иначе реагируют на воздействие внутренних и внешних факторов. В частности, у лошадей, собак реакция па воспалительные процессы довольно сильная и выражается обычно в резком лейкоцитозе в результате значительного увеличения количества нейтрофилов со сдвигом «влево», вплоть до развития лейкемоидной реакции миелоидного типа (например, при хрониосепсисе). У крупного рогатого скота, наоборот, воспалительные процессы, даже хрониосепсис, не вызывают в крови значительных изменений, хотя реакция также однотипна, т. е. лейкоцитоз с нейтрофилезом и регенеративным сдвигом.
Следует также отметить, что у животных с лимфоцитарным профилем крови чаще наблюдаются лейкозы лимфоидной формы, а у животных с нейтрофильной картиной кропи преимущественно встречаются миелолейкозы. У кур, эритроциты которых имеют ядра, кроме того, встречаются эритробластозы, последние пока не описаны у других сельскохозяйственных животных.

• Функциональные методы выделения и идентификации Т- и В-лимфоцитов крови
• Определение фагоцитарной активности лейкоцитов
• Определение некоторых физико-химических показателей крови
• Методы лейкоконцентрации
• Подсчет лейкоцитарной формулы и других цитограмм
• Приготовление цитологических препаратов, методы их фиксации и окраски
• Пункция кроветворных органов (техника и инструментарий)
• Получение проб крови и отдельных их компонентов
• Клиническая иммуногематология
• Система свертывания крови и противосвертывающие механизмы

Сельского хозяйство

Д.Т.Рахимжанова, к.в.н., доцент

АО «КАТУ им. С.Сейфуллина», Республика Казахстан,
Астана

ИНТЕПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ ОВЕЦ

В технике
гематологических исследований в настоящее время все чаще применяют электронно-измерительные
приборы, которые позволяют быстро получать наиболее точные результаты.
Электронные счетчики автоматы и гематологические комплексы за несколько минут и
даже секунд определяют число эритроцитов, лейкоцитов, кровяных пластинок,
количество гемоглобина, белка и ряда других параметров крови [1,2]. Гематологический анализатор
нового поколения PCE-170N (Австрия) имеет множество
полезных функций и предоставляет более надежный уровень точности и
удобства.  Особенностями данной модели
является то, что все 18 получаемых параметров крови, могут быть показаны на
экране в виде гистограммы и распечатаны. Поскольку данный прибор предназначен,
главным образом, для медицинских целей, встал вопрос о том, соответствуют ли
получаемые параметры прибора PCE-170N истинным значениям при
исследовании крови животных. Возможно ли прямое исследование показателей крови
различных видов животных и птиц, или необходимы, какие либо коррективы.

Таким образом, целью
наших исследований было провести сравнительный анализ некоторых гематологических
показателей у овец с применением традиционных методов исследования, с данными,
полученными при помощи гематологического анализатора PCE-170N.

Для проведения исследований
использовали овец в возрасте 1,5-2 года. Подбор овец
в опытную группу  проводили по принципу аналогов, использованы клинически
здоровые животные. Для гематологических исследований у  опытных овец кровь из яремной вены брали в утреннее время,
преимущественно перед кормлением.

Для получения цельной крови, чтобы
она не свертывалась, добавляли антикоагулянт гепарин из расчета  50 ЕД на 10 мл крови (0,5 мл). В крови
определяли: количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в камере Горяева; гемоглобин 
гематиновым методом по Сали; гематокритную величину микрометодом в модификации Й.Тодорова; цветовой
показатель. Определение
количества эритроцитов и лейкоцитов проводили по общепринятой методике в
счетной камере, путем разбавления крови пробирочным методом по Н.М.Николаеву. Подсчет тромбоцитов проводили
по методике Хауке. Гемоглобин в
крови определяли гематиновым методом по Сали на гемометре ГС-3. Гематокритный показатель
(относительный объем эритроцитов) определяли микрометодом в модификации
Й.Тодорова с использованием капилляров Панченкова.

Полученные результаты обрабатывали
методом вариационной статистики (по Г.Ф.Лакину) [3] и сравнивали с нормативами
гематологических показателей. Результаты исследования крови
общепринятыми методами приведены 1 таблице.

Таблица 1 –
Результаты исследований крови овец общепринятыми методами (n=10)

При
сравнении полученных результатов с нормальными величинами периферической крови
овец были выявлены отклонения по таким показателям, как количество эритроцитов,
тромбоцитов и гематокрита. Так у опытных овец выявлены следующие изменения: эритроцитопения,
уменьшение гематокритного показателя и тромбоцитоз.

На втором этапе
работы эти же пробы крови овец были исследованы на  гематологическом анализаторе PCE-170N.

Автоматические
приборы для подсчета частиц крови основаны на регистрации электрических
импульсов, возникающих при прохождении микрочастиц через отверстие датчика.
Такие приборы назывались кондуктометрическими, а принцип их работы  назывался 
– импульсный.

Гематологический
анализатор  PCE-170N является прибором нового
поколения, который кроме счетчика частиц укомплектован гемоглобинометром,
электронным оборудованием, экраном и наружным принтером. Гематологический
анализатор PCE-170N предоставляет 18 стабильных
параметров крови благодаря высокотехнологичному компьютеру, который преобразует
измеренные сигналы в цифровые процессы.

Для сравнения
полученных результатов исследования с нормальными величинами нами проведены вычисления
ряда таких параметров как средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) или средний объем эритроцита (MCV). В частности, нормальные
величины таких показателей как, абсолютные количества лимфоцитов, гранулоцитов,
моноцитов были высчитаны нами с учетом общего количества лейкоцитов (100%) и
данных нормальной лейкоцитарной формулы овец. Следует отметить, что в доступной
ветеринарной литературе, мы не нашли нормальные величины крови овец для таких
показателей как, PCT (процент
тромбоцитов), MPV (средний
объем тромбоцитов) и PDW (ширина измерения тромбоцитов).

Результаты исследования
крови на гематологическом анализаторе PCE-170N представлены в таблице 2. Анализ результатов этих данных выявил наличие
отклонений по большинству параметров. Так у исследованных овец увеличено
количество лимфоцитов и моноцитов, количество же гранулоцитов наоборот понижено.
Такая же картина характерна для относительных количеств этих видов лейкоцитов,
за исключением моноцитов. Их относительное количество соответствует норме (2,1±0,06 %). Следовательно, у овец, содержащихся в условиях
клиники, наблюдается абсолютный видовой лейкоцитоз – лимфоцитоз. Уменьшение же
гранулоцитов (гранулоцитопения), по-видимому, связано с нейтропенией, поскольку
нейтрофилы составляют основную массу гранулоцитов крови. Картина красной крови
опытных животных также имеет существенные различия по сравнению с нормой. Так у
исследованных овец наблюдается уменьшение количества эритроцитов (3,8±0,4 млн/мкл) и гематокритного показателя (10,8±0,1%). Количество же гемоглобина соответствует нормальным
величинам (123,0±0,08 г/л). Все показатели,
отражающие физико-химические свойства эритроцитов (MCV, MCH и MCHC), так называемые индексы
эритроцитов, наоборот повышены, что связано с компенсаторной реакцией
кроветворных органов. Следовательно, наблюдаемое уменьшение числа эритроцитов
(эритроцитопения), вызвано недостаточным и неполноценным кормлением. Уменьшение
гематокритного показателя свидетельствует о наличии железодефицитной или В12-дефицитной
анемии.

Наиболее значительные
изменения обнаружены в показателях количества тромбоцитов. У опытных овец их
количество увеличено почти в 14 раз (7001,1±0,05 против 270-500 тыс/мкл у
здоровых животных). Увеличение количества тромбоцитов встречается после
операций и при многих незаразных и инфекционных заболеваниях. Однако, с учетом
клинического обследования животных, когда никаких существенных симптомов заболеваний
обнаружено не было, можно сделать предположение, о том, что данный феномен
связан с физиологическим распределительным тромбоцитозом, когда при возбуждении
симпатической нервной системы или после физической нагрузки, происходит выброс
тромбоцитов из депо-селезенки. В медицинской практике такой феномен наблюдается
у спортсменов и называется «тренинг-тромбоцитоз».

Таким образом,
результаты исследования крови на гематологическом анализаторе PCE-170N выявили наличие у животных таких
симптомов как лимфоцитоз, нейтропения, эритропения, уменьшение гематокрита,
увеличение среднего объема эритроцитов, среднего содержания гемоглобина в
эритроците и средней концентрации гемоглобина в эритроците.

При сравнении
результатов исследования крови, полученных с использованием разных методик
выявлено, что по основным показателям 
(количества лейкоцитов, эритроцитов) наблюдается достаточное сходство
(11,8±1,6 против 
12,3±0,6 и 3,3±2,1 против 3,8±0,4 соответственно). Показатели гемоглобина и гематокрита
отличаются больше, но в целом однонаправлены и 
соответствуют обнаруженным изменениям. Наиболее существенные различия
были обнаружены по количеству тромбоцитов 7001,1±0,05 (на аппарате PCE-170N) против 950,6±11,3 (метод Хауке). По-видимому, это связано с тем, что
данный прибор предназначен для исследования крови человека, когда нормальное
количество тромбоцитов находится в пределах 180-320 тыс/мкл. А поскольку плазма
крови овец богата тромбоцитами (в норме 270-500 тыс/мкл), то для получения
более точных данных, необходимо было ее предварительно разбавить изотоническим
раствором хлорида натрия.

Следует отметить, что
при статистической обработке данных, полученных на аппарате PCE-170N, не было случая, чтобы результат
какого-либо измерения отличался от остальных данных. В то же время, при
исследовании крови общепринятыми методами, в частности при подсчете эритроцитов
и лейкоцитов, в результате неточного разведения крови, были случаи, когда
некоторые данные приходилось отбрасывать. Большой разброс отклонений был также
при определении гемоглобина гематиновым методом по Сали.

Характеристикой
разброса экспериментальных данных служит среднее квадратичное отклонение
σ, которое можно определить по размаху наблюдений по формуле  σ = хмак – хмин /
К, где: хмак  и хмин –
максимальное и минимальное значение в данном ряде наблюдений; К – величина
коэффициента для данного числа измерений [3].

Таблица 2 – Результаты
исследования крови овец на гематологическом анализаторе PCE-170N (n=10)

В
наших исследованиях среднее квадратичное отклонение по всем показателям крови
было минимальным для данных, полученных на гематологическом анализаторе.
Среднее значение «m» (ошибка
средней арифметической) при определении на гематологическом анализаторе было
минимальным (0,24 против 3,58), что свидетельствует о высокой точности
полученных данных. Использование гематологического анализатора позволяет
получить большее количество параметров крови (18) а, следовательно, более полно
оценить состояние организма животных. Сравнительный анализ данных, полученных
при использовании общепринятых тестов, с результатами
электронно-автоматического метода выявил значительное преимущество последнего
по стабильности результатов (ошибка ±1%).

Использование
гематологического анализатора PCE-170N для исследования крови животных
является удобным и экономически эффективным (экономический эффект на 1 тенге
затрат составил 8,8 тенге) по сравнению с прямыми микроскопическими методами
исследований.  Производительность
гематологического анализатора PCE-170N превышает общепринятые методы
исследования крови. Весь процесс, от введения образца крови до получения 18
результатов, длится не более 30 сек, а для исследования 1 пробы крови
общепринятыми методами необходимо в среднем около 2-х часов.

Несомненным
достоинством использования гематологического комплекса является и то, что
получаемые параметры красной крови позволяют дифференцировать различные виды
анемий и в данном случае свидетельствовали о наличии у животных мегалоцитарной
и макроцитарной анемий. При длительном, хроническом течении данной патологии
этот феномен представляет собой компенсаторную реакцию со стороны органов
кроветворения.

Поскольку
у животных количество тромбоцитов периферической крови значительно выше чем у
людей, то при их подсчете на гематологическом анализаторе рекомендуется
разбавить исследуемую кровь физиологическим раствором или ввести соответствующий
коэффициент. Для овец, при существующей настройке
аппарата, он равен 0,14.

Литература

1
Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник/ Меньшиков В.В.,
Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.; Под ред. В.В.Меньшикова.-М.:
Медицина, 1987, – С.106-173.

2
Бикхард К. Клиническая ветеринарная патофизиология./ Пер. с нем. В.Пулинец.-М.:
ООО «АКВАРИУМ ПРИНТ», 2005.-С.38-92.

3
Лакин Г.Ф. Биометрия: Учебное
пособие для биологич. спец. вузов. 3—изд., перераб. и доп..- М.: Высшая школа,
1980.- 293 с.