Норма титров в крови
Наиболее точным методом лабораторной диагностики, позволяющим непосредственно выявить вирус COVID-19 в организме человека, является ПЦР (полимеразная цепная реакция). В то же время широко используется такой метод, как ИФА. И если результаты анализа ПЦР пациент может истолковать правильно без помощи врача, то с ИФА не все так просто: его результаты выражаются в численных значениях и терминах, непонятных большинству обывателей. Эти значения принято называть титром антител к коронавирусу.
Что такое ИФА и что он может выявить
ИФА – это иммуноферментный анализ на антитела. Этот анализ основан на реакции «антиген-антитело». Вирусы, бактерии и другие микроорганизмы, попадающие в организм, несут с собой антигены – вещества (обычно белки или полисахариды), генетически чужеродные для организма человека. В ответ на их внедрение иммунная система вырабатывает антитела – белки иммуноглобулины. Они соединяются с антигенами, образуя иммунный комплекс (этот процесс и называют реакцией «антиген-антитело»). Иммунные клетки распознают эти комплексы и нейтрализуют вредное влияние болезнетворных микроорганизмов.
На заметку:
ИФА находит не сам коронавирус, а определяет наличие антител, которые вырабатываются организмом для борьбы с ним.
Тест ИФА помогает обнаружить специфические антитела к возбудителям определенных заболеваний в крови, моче, слюне, спинномозговой жидкости, молоке и т. д. Но самих возбудителей ИФА не выявляет, поэтому его и называют анализом на антитела. ИФА позволяет узнать о наличии или отсутствии антител к коронавирусу, определить их тип и узнать, был ли человек заражен, когда произошло заражение и на какой стадии находится заболевание, а также понять, болел ли человек COVID-19 раньше.
Какие антитела к коронавирусу определяет ИФА
С помощью ИФА находят несколько видов антител (иммуноглобулинов) к коронавирусу, но самыми информативными являются два из них — IgG и IgM.
После инфицирования Ковидом (и другими возбудителями инфекционных заболеваний) первыми появляются иммуноглобулины класса М. Они появляются уже через неделю после заражения COVID-19, поэтому служат индикатором острой стадии заболевания.
Иммуноглобулины класса G определяются в сыворотке крови с третьей недели после инфицирования. Их наличие говорит о том, что человек уже переболел коронавирусной инфекцией. Максимальный уровень антител G наблюдается примерно через три недели с момента инфицирования. После выздоровления иммуноглобулины M исчезают, а G могут оставаться в организме длительное время и служить для его защиты от повторного инфицирования. Таким образом, выявление иммуноглобулинов IgM свидетельствует об остром процессе заболевания, а IgG – о том, что человек уже переболел COVID и у него выработались антитела к нему.
ВАЖНО: обнаружение IgM не всегда свидетельствует об острой стадии заболевания: эти иммуноглобулины могут присутствовать и на стадии выздоровления.
Титрование и результаты ИФА
Существуют различные варианты ИФА; особо широко применяется твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). По типу результата ИФА бывает качественным и количественным. Качественный показывает только наличие или отсутствие иммуноглобулинов IgG и IgM. Количественный ИФА проводится с помощью титрования. Титрование – это лабораторный метод, с помощью которого определяется количество того или иного вещества, растворенного в пробе. Оно позволяет установить концентрацию антител к коронавирусу в сыворотке крови и определить скорость развития и стадию заболевания.
Иммуноферментный анализатор – автоматизированный прибор, предназначенный для анализа уровня антител в сыворотке крови, диагностики состояния щитовидной железы и репродуктивной функции, тестирования при аллергических и онкологических заболеваниях.
Результаты количественного ИФА указываются в условных единицах (например, МЕ/мл, Ед/л. АЕ/мл и т.п.). С точки зрения терминологии, не совсем корректно называть эти результаты «титром антител». Титр – это максимальное разведение сыворотки крови, при котором еще можно выявить антитела, и выражается он в виде соотношения, например, 1:70, 1:200, 1:500 и т. п. В данном же случае речь идет о количестве антител к коронавирусу в сыворотке крови. Тем не менее, значения, полученные в результате ИФА-теста, называют титрами антител. Далее будут рассмотрены вопросы лабораторной диагностики COVID-19 с помощью ИФА именно в этом контексте.
Расшифровка результатов
Для определения иммуноглобулинов к коронавирусу применяются специально разработанные тест-системы на антитела к COVID-19. При расшифровке результата анализа нужно ориентироваться на установленные для той или иной тест-системы референсные значения иммуноглобулинов. Референсные значения – это диапазон нормальных результатов анализов; его получают путем усреднения результатов при массовом тестировании здоровых людей. Поскольку лаборатории пользуются различными тест-системами, то и референсные значения могут отличаться. В частности, на сайте Мосгорздрава указаны такие референтные значения при COVID-19: для антител IqG – 10.0, для IqM – 2.0. В результатах анализа ИФА рядом с числами могут стоять буквы КП, что расшифровывается как коэффициент позитивности.
Результаты ИФА-тестирования могут быть такими:
| IgM ˂ 1,0IgG ˂ 10,0 | IgM от 1,0 до 2,0IgG ˂ 10,0 | IgM ≥ 2,0IgG ≥ 10,0 | IgM ≥ 2,0IgG ˂ 10,0 | IgM ˂ 2,0IgG ≥ 10,0 |
| Антител к коронавирусу нет, человек не сталкивался с ним раньше. | Сомнительный результат. Возможно, начальная стадия или скрытая форма заболевания. | Сомнительный результат. Возможно, заболевание, протекает в скрытой форме. | Активная стадия заболевания (даже при отсутствии симптомов). | Человек переболел COVID-19, происходит формирование иммунитета к нему. |
Сравнив полученный результат анализа на антитела и показатели из данной таблицы, можно сделать предварительный вывод о наличии или отсутствии заболевания. Например, показатели IgM 1.23 и IgG 132.12 говорят о том, что человек уже переболел COVID и у него выработался иммунитет. А показатель IgM 5.57 и IgG: 8.92 значит, что это острая стадия заболевания.
Но самостоятельно расшифровывать полученные результаты небезопасно: ИФА-тест не может использоваться для окончательной постановки диагноза: он является вспомогательным способом диагностики. Кроме того, у используемых лабораториями тест-систем разная чувствительность, соответственно, могут отличаться и референсные значения IgG и IgM. Поэтому интерпретация результатов теста на антитела к COVID-19 должна осуществляться врачом на основе клинических проявлений заболевания, результатов других исследований (анализ ПЦР, КТ легких и т.д.) с учетом эпидемиологической ситуации.
ИФА-тест определяет титр антител в крови и позволяет узнать, переболел ли человек COVID-19.
Ответы на частые вопросы
Какой титр антител к коронавирусу считается высоким?
Четкие количественные критерии для систем тестирования на антитела к коронавирусной инфекции пока не выработаны. На данном этапе во всем мире осуществляется сбор и накопление сведений о новом коронавирусе, в том числе данных о его лабораторной диагностике методом ИФА. Поэтому невозможно сказать, какой именно титр антител к нему может считаться достоверно высоким. По словам Ивана Скороходова, члена ассоциации аллергологов и иммунологов России, человек, переболевший коронавирусом, может стать донором плазмы для тяжелых больных, если показатели IgG у него будут достаточно высокими. Для этого важно проконтролировать условия: титр IgG должен быть больше 40, а IgM больше или равно 1,5, или же титр IgG больше 80, а IgM больше или равен нулю.
Какой титр антител указывает на то, что у человека сформировался иммунитет к коронавирусу?
Чтобы сформировался иммунитет к COVID-19, показатель иммуноглобулинов IgG должен быть больше 10. Но даже если по результатам анализа обнаружены иммуноглобулины IgG в таком количестве, нельзя утверждать, что человек будет обладать стойким иммунитетом к COVID.
Максимальный уровень иммуноглобулинов класса G наблюдается спустя два-три месяца после заражения. Но клинические исследования показали, что у большинства людей, заразившихся коронавирусом, защитный титр антител существенно снижается уже через три месяца после перенесенного заболевания. А у тех, кто страдает сахарным диабетом, ожирением, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, титр иммуноглобулинов G начинает снижаться еще раньше – через два месяца после перенесенного заболевания. В частности, по данным ученых из Королевского колледжа Лондона, антитела к коронавирусу сохранились лишь у 17% переболевших им. Можно лишь предположить, что иммунитет к коронавирусу кратковременный. Чтобы установить, насколько стойкий иммунитет после перенесенной коронавирусной инфекции, необходимы углубленные иммунологические исследования.
Какой титр антител к коронавирусу считается достаточным?
По причине отсутствия точных данных, подтвержденных клиническими исследованиями, нельзя говорить и о достаточном для дальнейшей защиты от повторного заражения титре антител к коронавирусу. Основываясь на общих закономерностях, характерных для вирусных инфекций, напрашивается вывод, что после перенесенной инфекции при повторном заражении иммунная система формирует антитела быстрее. Это значит, что при повторном инфицировании болезнь будет протекать легче.
На заметку:
Считается, что результаты иммуноферментного анализа отличаются высокой точностью, но иногда (например, при перекрестной реакции с другими коронавирусами) анализ может показать ложноположительный результат. Ложноотрицательные результаты возникают и из-за недостаточной чувствительности теста. Во всех сомнительных случаях обязательно ПЦР-тестирование.
Какие показания для проведения диагностики COVID-19 с помощью ИФА?
Сдать кровь на антитела к коронавирусу необходимо в следующих случаях:
- для диагностирования активной стадии заболевания при наличии респираторных симптомов;
- для исключения заражения при установленном контакте с заболевшим;
- для уточнения диагноза заболевания при слабо выраженной симптоматике;
- для диагностики скрытых форм (носительства) коронавирусной инфекции;
- для того чтобы узнать, переболел ли человек COVID-19 и сформировался ли у него иммунитет к коронавирусу, в том числе при бессимптомном течении заболевания;
- при отборе донора для переливания крови пациентам с тяжелым течением коронавирусной инфекции.
Советы по ИФА-диагностике COVID-19
Совет №1
Тест на антитела к COVID-19 не используется для ранней диагностики заболевания, т. к. они выявляются через одну-две недели после начала болезни. Чтобы обнаружить инфекцию раньше, пройдите тест ПЦР.
Совет № 2
Сдавать анализы на антитела к коронавирусу лучше в тех лабораториях и медицинских центрах, которые работают в соответствии с международными стандартами качества. В этом случае больше вероятность того, что анализ будет проведен без ошибок.
Титр антител – это максимальное разведение кровяной сыворотки, содержащее в своем составе специфические антитела. При изучении иммунного статуса делается одно разведение сыворотки, соответственно, прилагаемой к тест-системе (1:50, 1:100), после чего при необходимости рекомендуется ее титрование посредством последовательных двукратных разведений.
Установлено, что при наличии в анализе титров антител до обратного значения 1:600-1:800 существует прямо пропорциональная связь между показателем оптической плотности и значением титра антител данной сыворотки. Выше данной обратной величины подобная зависимость нарушается и при последующем двукратном титровании (1:1600, 1:3200, 1:6400 и т.д.) возникает ошибка, которая тем больше, чем больше разведение.
Рассмотрим подробнее, что это – титр антител.
Разновидности антител
Человеческий организм на протяжении всей жизни «знакомится» с разными возбудителями болезней, химическими веществами, продуктами распада клеток. В ответ на это он продуцирует собственные иммуноглобулины, которые еще называют антителами крови – это специфические белковые соединения, которые формируются из лимфоцитов и выступают в качестве стимуляторов иммунной защиты.
Многим интересно, что значит титры антител. В иммунологических исследованиях выделяется несколько видов антител, действующих строго на конкретные антигены. Их определяют при помощи метода титрования и в их число входят:
- IgM – первоначальный иммуноглобулин, который начинает продуцироваться при попадании инфекции в организм. Его роль заключается в стимуляции иммунитета на первичную борьбу с патологическим процессом. Наличие IgG в крови наблюдается через 3-5 суток после начала болезни. Эти антитела формируют устойчивый иммунитет к определенным инфекциям, отвечают за результативность вакцинации.
- IgA – защищают пищеварительный тракт, дыхательные пути и мочевыделительную систему от вредоносных микробов. Они связывают патогенные объекты, не давая им закрепиться на слизистых покровах.
- IgE – активизируются в целях защиты организма от грибков, паразитов и аллергенов, и локализуются, главным образом, в бронхах, желудке и кишечнике. Данные антитела принимают участие в процессах формирования вторичного иммунитета. В плазме крови в свободном виде их практически нет.
- IgD – фракция, которая до сих пор недостаточно изучена. Считается, что эти агенты отвечают за местный иммунитет, начинают продуцироваться при обострении миеломной болезни или хронических инфекций. В сыворотке составляют меньше 1% фракции всех существующих иммуноглобулинов.
Все антитела могут свободно присутствовать в плазме крови либо прикрепляться к поверхностям инфицированных клеток. Узнав антиген, специфические белки начинают соединяться с ним с помощью хвоста. Он служит особым сигналом для иммунных клеток, отвечающих за процессы нейтрализации чужеродных объектов.
Типы в зависимости от взаимодействия
С учетом того, как взаимодействуют с антигенами белки, их также подразделяют на несколько типов:
- Антиинфекционные – связываются с телом болезнетворных микроорганизмов, уничтожая их.
- Антитоксические – не оказывают влияния на жизнедеятельность чужеродных тел, однако обезвреживают токсины, вырабатываемые ими.
- Аутоантитела – вещества, которые запускают механизм возникновения аутоиммунных нарушений посредством атаки здоровых клеток организма.
- Аллореактивные – это иммуноглобулины, выступающие против антигенов клеток и тканей иных организмов одного и того же биологического вида. Исследование на определение антител этой фракции проводится посредством титрования при трансплантации различных органов.
- Изоантитела – белковые соединения, которые продуцируются против агентов клеток иных биологических видов.
- Антиидиотипические – соединения, которые предназначены для нейтрализации переизбытка собственных антител.
Как проводится анализ на титры антител? Это очень распространенное исследование.
Исследование крови
Современным методом лабораторной диагностики различных заболеваний считается анализ крови ИФА (иммунофлюоресцентный анализ). Этот тест на антитела позволяет определить титр (функциональность) иммуноглобулинов, их разновидность и установить, на каком этапе развития находится конкретный патологический процесс.
Алгоритм проведения
Методика определения титра антител состоит из нескольких стадий: сначала лаборант получает у человека сыворотку крови. Полученный образец помещается на специализированную пластиковую планшетку с наличием лунок, в которых присутствуют очищенные антигены искомых возбудителей или белка (в случаях если необходимо определить антиген). В лунки добавляется специальное окрашивающее вещество, которое при возникновении положительной ферментной реакции меняет цвет иммунных комплексов. По плотности окрашивания делается вывод о результатах проведенного анализа крови на титр антител.
Сроки
Для проведения данного тестирования исследователям необходимо от одного до трех дней. Сам анализ бывает двух видов: качественный и количественный. В первом случае указывается, что в сыворотке крови будет найден или, наоборот, отсутствовать искомый антиген. Тест количественного типа проводится в соответствии с более сложной цепной реакцией и позволяет сделать вывод о концентрации антител, установить их разновидность, оценить с какой скоростью развивается патологический инфекционный процесс.
Показания к назначению
Полный перечень показаний к проведению ИФА охватить невозможно, однако наиболее распространенными целями осуществления данного анализа является диагностика острых и хронических форм таких инфекционных патологий:
- IgG к ВИЧ;
- IgM и IgG к гепатитам вирусного происхождения А, B, C, E;
- IgM и IgG к цитомегаловирусу;
- IgM и IgG к герпесу;
- IgM и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- IgG к паразитарным болезням;
- IgM и IgG к токсоплазмозу;
- IgM и IgG – титры антител к кори, краснухе, сальмонеллезу, клещевому энцефалиту, дизентерии и прочим заболеваниям;
- IgM и IgG к инфекциям, которые передаются через половые пути;
- IgG к хеликобактерной инфекции;
- в целях общей оценки показателей иммунитета и маркеров аутоиммунных заболеваний;
- определение онкологических маркеров (фактор некроза опухоли, простатспецифический антиген, раково-эмбриональный антиген и другие);
- определение уровня гормонов крови (прогестерон, пролактин, тестостерон, тиреотропный гормон и другие).
Расшифровка
В норме титров антител в анализе быть не должно. Результатом качественного типа исследования является однозначное заключение: искомое вещество либо не обнаружено, либо найдено в образце крови. Если же речь идет о количественном типе анализа, то концентрация может быть выражена числовым значением либо количеством знаков «+».
Анализируемыми показателями при этом считаются:
- IgM – присутствие данного класса иммуноглобулинов свидетельствует об остром течении инфекционного процесса в организме. Их отсутствие может свидетельствовать об отсутствии возбудителя либо о переходе патологического процесса в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате тестирования на IgM в большинстве случаев свидетельствует о скрыто протекающей либо хронической инфекции.
- Совместное присутствие IgM и IgA – два положительных результата свидетельствуют о разгаре острой фазы имеющейся патологии.
- IgG – хронизация заболевания либо выздоровление и формирование иммунитета к конкретному инфекционному агенту.
Многих пациентов интересует вопрос – что значит результат отрицательный? Титры антител отсутствуют? Результат, который отмечен знаком «—», считается отрицательным и означает, что иммунитета к определенному инфекционному возбудителю в организме пациента не обнаружено.
Еще одним важным количественным показателем является индекс авидности антител, который выражается в процентах. Он указывает на то, какой промежуток времени прошел от начала развития инфекционного процесса. Чем такой индекс выше, тем длиннее данный период.
Преимущества методики
Бесспорными преимуществами данной методики исследования считаются ее специфичность и высокая чувствительность. Чувствительность означает возможность распознать искомый элемент, даже если его содержание в образце невысокое. Специфичность подразумевает безошибочность диагностирования: если результаты положительные, значит, обнаружены именно те антитела или антигены, которые предполагались.
Высокая степень технологичности осуществления иммуноферментного анализа методом титрования минимизирует воздействие человеческого фактора, что существенно уменьшает вероятность ошибки. Основная масса используемых в современных клиниках реактивов и тест-систем для ИФА производятся в промышленных условиях, что гарантирует достоверный результат.
Основной недостаток
Основным недостатком данной диагностической методики является то, что для ее проведения необходимо знать, что именно нужно найти. Анализ подразумевает, что врач заранее предполагает, каким патологическим агентом вызвано то или иное заболевание.
Еще один недостаток данного исследования заключается в том, что ИФА на титры антител – это довольно дорогой метод анализа крови, что часто не по карману многим пациентам. А это означает, что к назначению такой диагностики врач должен подходить с умом.