Нормы при анализе крови на пцр
ПЦР или полимеразная цепная реакция (Рolymerase Сhain Reaction) – это высокоинформативный метод диагностики, предназначенный для выявления генетических отклонений и дифференциации инфекционных заболеваний.
Клинико-лабораторная оценка биоматериала (крови, мочи и т.п.) основана на определении генно-молекулярной структуры возбудителя инфекции, что нивелирует риск ложноположительного результата анализа. За научно-медицинскую ценность метода его разработчик Кэри Мюллис был удостоен Нобелевской премии в 1993 г.
Специфика метода ПЦР крови на инфекции
Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:
- ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
- РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.
Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).
В ходе многократной реакции амплификации:
- разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
- образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
- термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.
При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:
- обнаруживает инфекционного агента;
- дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
- определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).
ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.
Области применения анализа
В настоящее время в медицине и криминалистике, а также для клонирования генов и установления родственных связей применяют более десятка разновидностей амплификации. В ежедневной практике кровь на ПЦР назначают медицинские специалисты:
- педиатр;
- гинеколог;
- уролог;
- дерматовенеролог;
- инфекционист;
- фтизиатр;
- пульмонолог.
Генно-молекулярная диагностика успешно применяется в неонатологии. С помощью полимеразной цепной реакции выявляют возможное заражение младенцев внутриутробно и сразу после появления на свет. Для детей с риском инфицирования анализ проводят в первые 48 часов после рождения и повторно в возрасте 3-6 месяцев.
Кроме инфекционных заболеваний, Рolymerase Сhain Reaction помогает диагностировать наследственные аномалии и мутации. В перинатальный период методом ПЦР у будущего малыша можно обнаружить:
- гемофилию – нарушение свертываемости крови;
- болезнь Хантера – патологии обменных процессов;
- мусковидоз – нарушение внешнесекреторной функции желез;
- нервно-мышечную миодистрофию Дюшенна-Беккера;
- первичный иммунодефицит;
- синдром Альпорта – патологию почек.
PCR используют для определения мутантных генов и их РНК-продуктов в диагностике онкологических заболеваний. Высокая чувствительность молекулярного метода обеспечивает выявление онкопатологий в доклинической стадии, когда очаг опухоли не превышает 0,01 см3 в размерах.
По обнаруженным онкогенам, биологическим канцерогенам и антионкогенам диагностируют исходную стадию:
- онкогематологических болезней (рака крови и лимфатической системы);
- злокачественных образований молочных желез;
- аденокарциномы толстой кишки;
- меланомы;
- рака ротоглотки;
- наследственных форм рака.
Высокой онкогенностью обладают штаммы 16, 18, 31, 33, 35 ВПЧ (вируса папилломы человека). В 50% случаев вызывают карциному шейки матки у женщин – раковую опухоль эпителиальных клеток. Обнаружение неопластических клеток в доклинической стадии рака значительно повышает шансы на успешное лечение болезни.
Особую ценность ПЦР имеет для Службы крови. Метод позволяет определить заражение гепатитами, ВИЧ, сифилисом в бессимптомный инкубационный период. На этой стадии иммунная система еще не продуцирует антитела к возбудителям, и выявить заболевания с помощью серологических исследований невозможно.
Проверка донорской крови ПЦР предупреждает возможное инфицирование реципиента
Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций
Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.
Краткий перечень возбудителей и заболеваний, определяемых по крови, мазку и моче
| Вирусы | ||
| герпесовирус | 1 тип | обычный герпес |
| 2 тип | генитальный герпес | |
| 3 тип | краснуха | |
| 4 тип (цитомегаловирус) | цитомегалия | |
| 5 тип (Эпштейн-Барр) | инфекционный мононуклеоз | |
| папилломы человека (21 штамм) | папилломатоз | |
| HAV, HBV, HCV | гепатит А, В, С | |
| иммунодефицита | ВИЧ, СПИД | |
| Бактерии | ||
| бледная трепонема | сифилис | |
| гарднереллы | гарднереллез | |
| гонококки | гонорея | |
| уреаплазма | уреаплазмоз | |
| сальмонелла | сальмонеллез | |
| палочка Коха | туберкулез | |
| листерия | листериоз | |
| стрептококки и стафилококки | сепсис, пневмония, менингит | |
| Паразиты, прокариоты, простейшие | ||
| описторхи (печеночные сосальщики) | описторхоз | |
| плазмодий | малярия | |
| токсоплазма | токсоплазмоз | |
| лямблии | лямблиоз | |
| хламидии | хламидиоз | |
| трихомонада | трихомониаз | |
| микоплазма | микоплазмоз | |
| эхинококки | эхинококкоз | |
| шистосомы | шистосомоз | |
| цестоды | альвеококкоз | |
Комплексный анализ на ЗППП носит название «профиль ПЦР-12», по количеству определяемых возбудителей. В профиль входят половые инфекции:
- хламидиоз;
- гонорея;
- трихомониаз;
- сифилис;
- ВИЧ;
- обычный и генитальный герпес;
- цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
- папилломатоз;
- гепатиты В, С.
А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).
Показания к проведению ПЦР-12
Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:
- длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
- увеличение лимфатических узлов;
- кожная сыпь;
- зудящие высыпания в области наружных половых органов;
- поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
- боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
- диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
- лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.
ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.
Основные симптомы и осложнения половых инфекционных заболеваний
Основные достоинства PCR
Метод полимеразной цепной реакции применяется в совокупности с другими исследованиями или заменяет:
- Микроскопию (обычную и люминесцентную) – изучение крови под микроскопом (люминесцентным микроскопом).
- Бактериологический посев – высаживание биоматериала на питательные для паразитов, бактерий и т. д. среды, и выращивание в лабораторных условиях колоний болезнетворных микроорганизмов.
- Серологические тесты – основаны на выявлении специфических антител (иммуноглобулинов) к антигену (инфекционному агенту): реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других анализов. Прерогативы ПЦР-диагностики:
- Высокая точность типизации возбудителей. Оценка уникальных для каждого микроорганизма фрагментов ДНК и РНК дает возможность распознать конкретный штамм вируса, разновидность паразитов, грибков и бактерий.
- Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Чтобы обнаружить инфекцию, для ПЦР достаточно молекулярного присутствия патогенного микроорганизма.
- Оперативность проведения анализа. В отличие, к примеру, от бакпосева для выполнения которого требуется 7-14 дней, результаты PCR можно получить через 24 часа (в платных диагностических центрах интервал ожидания может быть сокращен до 5-7 часов).
- Универсальность. Диагностические возможности метода в области инфекционных болезней практически не ограничены.
- Комплексность. Одного образца крови достаточно для проведения исследования на несколько патогенных микроорганизмов.
- Специфичность. При проведении ПЦР исключены перекрестные реакции иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами, следовательно, невозможен ложноположительный результат исследования.
О недостатках Рolymerase Сhain Reaction можно говорить в свете высоких требований к оснащению лаборатории и квалификации медицинского персонала. Анализ проводится в условиях абсолютной стерильности, со строгим соблюдением температурного режима. Присутствие посторонних ДНК в воздухе может исказить результаты исследования.
Важно! Некоторые виды инфекционных агентов способны мутировать. Такое явление наблюдается редко, но изменение РНК-штамма может стать причиной ошибочной дифференциации. В остальных случаях ПЦР-диагностика близка к идеальной.
Подготовка к анализу крови методом полимеразной цепной реакции
Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:
- отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
- ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
- сокращение физической активности накануне забора крови;
- соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).
За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.
Пример бланка с результатами анализа
О результатах и ценах
Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:
- «обнаружено» или «положительно» – наличие инфекционного заболевания;
- «не обнаружено» или «отрицательно» – отсутствие заражения.
Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.
В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.
Итоги
Полимеразная цепная реакция (реакция амплификации) – современное клинико-диагностическое исследование крови и других биожидкостей человека. Анализ основан на обнаружении и дифференциации молекулярного фрагмента вируса, бактерии и т. д. для определения инфекции или поврежденного гена для выявления мутаций, анормальных отклонений в развитии, наследственных патологий.
Ключевые преимущества ПЦР перед иными лабораторными тестами:
- диагностика заболеваний в исходном периоде (при отсутствии психосоматических проявлений);
- обнаружение нескольких патогенов, атакующих организм по одному биообразцу;
- чувствительность практически ко всем инфекционным агентам;
- определение начальных (доклинических) форм рака;
- определение генетических патологий во внутриутробном периоде развития ребенка.
Исследование является высокоинформативным, доступным и оперативным по времени выполнения. Результаты можно получить на следующий день после анализа.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.
КОНСУЛЬТАЦИЯ ПО РЕЗУЛЬТАТАМ АНАЛИЗОВ или УЗИ — 500 руб.
Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.
Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.
Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР
На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:
С помощью метода ПЦР можно обнаружить:
- гепатит C, B;
- уреаплазмоз половых органов;
- ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
- хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
- микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
- бактериальный вагиноз;
- кандидоз половых органов;
- инфекционный мононуклеоз;
- туберкулез;
- сальмонеллез;
- туберкулез (легочные и внелегочные формы);
- листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
- цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
- детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
- ВИЧ.
При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.
Суть метода полимеразной цепной реакции
Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.
ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.
Достоинства и недостатки метода ПЦР
Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.
Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:
- Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
- Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
- Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
- Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
- Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.
Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.
Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка
Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.
- Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
- Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
- С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.
Мазок у женщин
Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища. При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.
- За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
- За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
- За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
- Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
- За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.
Мазок у мужчин
Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.
- За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
- Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
- Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
- Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.
Анализ крови
Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.
- Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
- Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
- Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
- Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
- Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.
Как проводится тест ПЦР?
Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:
- Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
- Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
- Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
- Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
- Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
- Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.
При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.
Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.
ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.
Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.
Как расшифровать ПЦР анализ
Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.
Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.
- Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
- Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.
Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.
Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.
Точность расшифровки результатов ПЦР анализа
Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:
- Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
- Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
- Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).
Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.
Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter