Подсчет гемоглобина по сали

В крови содержится в среднем 14 г % гемоглобина, у женщин – 12 – 15, у мужчин – 13 -16 г % (соответственно 120- 150 и 130- 160 г/л). Определение количества гемоглобина имеет большое значение и является обязательным компонентом анализа крови. Гемоглобин определяется колориметрическими методами. В настоящее время метод Сали в клинике применяется редко, так как существуют более точные методы с помощью фотоэлектроколориметров. Гемометр Сали используют в учебных целях.

Метод Сали основан на превращении гемоглобина в хлорид гематина коричневого цвета при добавлении к крови хлористоводородной кислоты. Определение гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путём разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворённых веществ в обоих растворах будет совпадать, а количества веществ будут соотноситься как их объёмы. Зная количество гемоглобина в стандартном растворе (16,7 г%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка.

Цель работы: определить содержание гемоглобина в крови по методу Сали.

Оснащение: гемометр Сали, стерильный скарификатор, 0,1% раствор HCI, фильтровальная бумага, вата, спирт, эфир, йод, дистиллированная вода. Объект исследования — человек.

Проведение работы. В среднюю пробирку гемометра наливают раствор HCI до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек с помощью фильтровальной бумаги. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают её соляной кислотой из верхнего слоя.

После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по её дну, и оставляют стоять на 8-10 минут. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандартного (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в граммах на 100 г исследуемой крови (при переводе в единицы СИ полученную цифру умножают на 10, получая величину гемоглобина в граммах на 1 л крови). Можно вычислить также относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Оформление протокола. Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Вычислите относительное процентное содержание гемоглобина следующим образом. Допустим, количество гемоглобина в крови соответствует 14 делениям гемометра. Тогда по пропорции вычисляем относительное содержание гемоглобина в процентах. Сравните полученное значение с нормой.

16,7 г % – 100 %

14,0 г % – х

х =(100-14,0)/16,7

Стандартный анализ крови обязательно включает в себя показатель уровня гемоглобина. Такой анализ называется клиническим и является базой для исследования практически всех заболеваний. Белок гемоглобин находится в клетках крови – эритроцитах. Он выполняет важную функцию клеточного дыхания. Благодаря железу, которое в нём содержится, кровь имеет красный цвет. Колориметрический принцип определения уровня гемоглобина основан именно на таком свойстве пигментации. Как делать такой анализ предложил швейцарский врач Герман Сали (Herman Sahli) в конце 19 века.

Принцип проведения

Определение количества гемоглобина по методу Сали является классическим, его до сих пор используют во многих лабораториях. Гемоглобин – это сложный белок из группы гемопротеинов. Он состоит из двух компонентов: белкового глобина и небелкового гема. Одна молекула гемоглобина содержит 4 гема. В центре каждого из них находится атом железа, который умеет обратимо соединяться с атомами кислорода и углекислого газа, при этом не окисляясь. Именно наличие этого элемента в крови придаёт ей характерный цвет.

На основе такого свойства гемоглобина Г. Сали изобрёл метод измерения его количества, который основан на определении цветового показателя крови. В кислой среде глобин легко отделяется от гема, который начинает взаимодействовать с кислородом. Такая химическая реакция также меняет валентность железа и позволяет образовать новое вещество – гематин. Его и используют для колориметрического анализа количества гемоглобина в крови по методу Сали.

Что представляет собой гемометр Сали

Для подсчёта уровня гемоглобина используют прибор, который изобрёл швейцарский диагност. Гемометр Сали состоит из трёх пробирок одинакового размера. Две пробирки запаяны и наполнены раствором крови в соляной (хлороводородной) кислоте. Такая смесь носит название гематин и имеет коричневый оттенок. Интенсивность цвета зависит от количества гемоглобина. В запаянных пробирках гемометра цвет соответствует стандарту содержания гемоглобина в крови здорового человека.

Третья пробирка имеет шкалу, на которой отмечены грамм-проценты и единицы гемометра. Эта ёмкость заполняется анализируемым материалом. Колориметрический анализ производится лаборантом визуально. Анализируемый гематин разбавляют водой до определённого цвета, который сравнивают со стандартным образцом.

Методика проведения

Для проведения лабораторного исследования крови по методу Сали осуществляют следующие действия. Пустую пробирку гемометра заполняют соляной кислотой до нижней отметки. Концентрация раствора должна составлять 0,1 Н. Далее специальным капилляром, который входит в комплект гемометра, набирают 0,02 мл крови пациента.

Капилляр опускают в кислотный раствор и аккуратно выпускают в него, забранный у пациента, материал. Кровь должна оказаться под слоем кислоты так, чтобы сама кислота осталась прозрачной. Далее содержимое пробирки перемешивают и выдерживают в нетронутом состоянии 5-15 минут. За это время произойдёт взаимодействие жидкостей, и образуется гематин коричневого цвета.

В образовавшееся вещество по капле добавляют дистиллированную воду, пока цвет не станет идентичным с цветом образца в запаянной пробирке гемометра. Каждый раз гематин размешивают стеклянной палочкой. При этом жидкость поднимается, её уровень соответствует шкале контрольной пробирки. Как только цвет анализируемого материала сравняется со стандартным цветом, лаборант отмечает, какому делению шкалы грамм-процентов соответствует поднявшаяся жидкость. Для перевода в необходимые граммы на литр полученную цифру умножают на 10.

Насколько точный метод определения гемоглобина

Швейцарский диагност изобрёл свой способ определения гемоглобина в крови в конце 19 века. На тот момент этот способ был самым точным. Но новые исследования, открытия в области медицины и молекулярной диагностики создали новые методы. Появились аппаратные методики, которые исключают человеческий фактор при исследованиях. Они способны оценивать биологический материал при помощи более точных замеров.

В связи с этим у метода Сали есть ряд недостатков, которые снижают точность измерения:

1. Анализ цветного показателя гематина лаборант проводит визуально. Поэтому на точность влияет освещение в помещении, способность конкретного человека различать нюансы цветового спектра, особенности зрения лаборанта. Но даже здоровый человеческий глаз не может улавливать минимальные отклонения цвета, в отличие от высокоточной аппаратуры.
2. Образцы в гемометре Сали со временем выцветают. Изменённый цвет стандарта даёт большую погрешность конечного результата.
3. Превращение крови в гематин имеет разное время реакции. Определить конечный этап реакции невозможно, он колеблется от 2 до 40 минут и зависит от содержания в крови белков. Также оттенок может меняться и из-за разного количества билирубина.

Из-за указанных недостатков колориметрическое измерение по методу Сали имеет погрешность до 30%. В феврале 2000 года был издан Приказ № 45 Министерства Здравоохранения РФ, в соответствии с которым смещение коэффициента показателя гемоглобина в крови не должно превышать 5%. В связи с этим использование метода Сали на сегодняшний день не является пригодным для использования в клинико-диагностических лабораториях.

Отзывы

Мария

Сдавала анализ крови после гриппа. Делала в своей поликлинике по прописке. Результат поверг меня в настоящий шок – гемоглобин был сильно завышен относительно нормы. Решила пересдать кровь, только уже в платной лаборатории. Показатели оказались в норме. Администратор лаборатории объяснила, что метод Сали, который часто используют поликлиники, имеет погрешность.

Андрей

А мне в поликлинике сразу сказали, что используют недорогой метод Сали. Типа у него есть погрешности, но в пределах нормы, но можете и в другом месте сдать, если сомневаетесь. Почитал, этот метод вообще-то давно используется, и никогда проблем у людей не было. Не собираюсь переплачивать за анализы в платных лабораториях.

Светлана

Учусь на медика метод Сали, мы не раз тестировали в лабораториях. И доверия к нему мало, погрешность есть. Если нужен тест на какое-то серьёзное заболевание, лучше проводить более высокоточное и современное обследование. Можно тоже колориметрическое обследование, но только гемиглобинцианидное. Но вообще странно, сейчас метод Сали уже почти не используют, найти поликлинику с такой лабораторией сложно.

Несмотря на неточность результатов исследования и устаревшие способы их проведения, в некоторых лабораториях продолжают использовать метод Сали для определения содержания гемоглобина в крови. Такой способ является самым недорогим, быстрым и технически простым, но без сомнений влияет на точность результатов анализа.

Соседние файлы в предмете Нормальная физиология

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #