Стандартный образец гликозилированного гемоглобина

Клиническое значение определения гликозилированного гемоглобина (HbA1c)

Очень важно при ведении больных сахарным диабетом добиться оптимального содержания глюкозы в крови. Контроль уровня глюкозы в крови больной может проводить самостоятельно (портативными глюкометрами) или в лаборатории. Результат единичного определения глюкозы в крови показывает концентрацию глюкозы на момент взятия, поэтому сделать какие-либо предположения о состоянии углеводного обмена больного между измерениями не представляется возможным. Оценить углеводный обмен у больного за длительный период времени можно только измеряя концентрацию гликозилированного гемоглобина в крови, согласно рекомендациям Комитета по контролю за диабетом и его клиническими осложнениями (DCCT). По данным исследований, проводимых DCCT, было показано, что риск развития и прогрессирования отдалённых осложнений диабета 1 типа тесно связан со степенью эффективности контроля уровня гликемии, выраженного в содержании гликозилированного гемоглобина в крови [10]. Специалистами из Великобритании было показано, что снижение содержания глюкозы в крови пациента, оцененное по концентрацииHbA1с, уменьшает частоту микроангиопатий при сахарном диабете 2 типа [4].

Характеристика показателя:

Гликозилированный гемоглобин (употребляется также термин «гликированный гемоглобин») образуется в результате неферментативного присоединения глюкозы к N — концевым участкам β — цепей глобина гемоглобина А1 и обозначается как HbA1c. Концентрация HbA1c прямо пропорциональна средней концентрации глюкозы в крови. У здоровых концентрация HbA1c в крови от 4 до 6%, у больных сахарным диабетом его уровень в 2 — 3 раза выше (в зависимости от степени гипергликемии). Образовавшийся HbA1cаккумулируется внутри эритроцитов и сохраняется в течение всего срока жизни эритроцита. Полупериод циркуляции эритроцита в кровяном русле составляет 60 суток, таким образом, концентрация HbA1c отражает уровень гликемии пациента за 60 — 90 дней до исследования [2, 3]. Огромное число исследований с использованием традиционных методов измерения содержания глюкозы подтвердило взаимосвязь HbA1c и уровня гликемии пациента 14. Результаты исследований, проведённых DCCT в 90-х годах, послужили основанием для подтверждения гипотезы о том, что уровень HbA1c отражает уровень глюкозы в крови и является эффективным критерием при мониторинге больных сахарным диабетом.

Стандартизация методов исследования гликозилированного гемоглобина:

В начале 90-х годов не существовало межлабораторной стандартизации методов измерения гликозилированного гемоглобина, что снижало клиническую эффективность использования данного теста 16. В связи с этим Американская Ассоциация клинической химии в 1993 году сформировала подкомитет по стандартизации методов измерения гликозилированного гемоглобина. В результате его работы была разработана Национальная программа по стандартизации исследований гликозилированного гемоглобина (NGSP). Производителей тест-систем для измерения гликозилированного гемоглобина обязали проходить строжайшую проверку на соответствие результатов с данными, полученными референсными методами DCCT. В случае положительного результата проверки производителю выдаётся «сертификат соответствия DCCT». Американская Диабетическая Ассоциация рекомендует всем лабораториям пользоваться только тестами, сертифицированными NGSP [7].

Методов исследования гликозилированного гемоглобина в настоящее время существует много:

• жидкостная хроматография
• аффинная хроматография
• электрофорез
• колоночные методики
• иммунологические методики

При выборе лабораторией анализатора для исследования гликозилированного гемоглобина, преимущество должно отдаваться анализаторам на основе референсного методаDCCT, каким является жидкостная хроматография. Использование стандартизированных методов исследования даёт лаборатории возможность получать результаты, которые можно сравнивать с данными, полученными с помощью референсных методов и опубликованнымиDCCT. Такое сравнение максимально повышает достоверность результатов исследований.

Чрезвычайно важно, чтобы лечащий врач использовал в своей работе результаты исследований, полученные только в тех лабораториях, которые проводят исследование гликозилированного гемоглобина методами сертифицированными NGSP.

Исследование концентрации HbA1c в лабораториях Ассоциации «Ситилаб»:

Концентрация гликозилированного гемоглобина (HbA1c) в лабораториях Ассоциации «Ситилаб» определяется референсным методом (DCCT) высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖК), (метод сертифицирован NGSP), на анализаторах D 10 фирмы «Bio -Rad», которая является мировым лидером в производстве анализаторов гликозилированного гемоглобина. Это исследование 04.01.140 — Гликозилированный гемоглобин.

Оценка среднего содержания глюкозы в крови:

Исследовательская группа при DCCT продемонстрировала клиническую значимость показателя HbA1c, как оценку средней концентрации глюкозы в крови (за 60 — 90 дней). В этих исследованиях у пациентов раз в 3 месяца регистрировали дневной профиль содержания глюкозы (по семи измерениям ежедневно). Полученный профиль сопоставляли с уровнемHbA1c. В течение 9 лет было проведено более 36 000 исследований. Эмпирически была получена линейная зависимость среднего содержания глюкозы и уровня HbA1c:

Средняя концентрация глюкозы (мг/100 мл)=30,9 х (HbA1c)-60,6, где:

HbA1c — концентрация гликозилированного гемоглобина.

Проще говоря, изменение HbA1c на 1% соответствует изменению среднего содержания глюкозы на 30 мг/100 мл (1,7 ммоль/л).

Примечание: Указанная взаимосвязь была получена при исследовании концентрации глюкозы в капиллярной крови. Концентрация глюкозы в сыворотке крови приблизительно на 15% выше.

Для интерпретации результатов исследований HbA1c может быть использована диаграмма (рис. 1) [11].

Рис. 1. Диаграмма контроля углеводного обмена у больных сахарным диабетом

Примечание: Концентрация глюкозы указана в ммоль/л, в скобках в мг/100 мл, 1 — Высокий риск развития отдалённых осложнений, таких как ретинопатия, нефропатия и нейропатия. 2 — Повышенный риск возникновения гипогликемических реакций для пациентов с диабетом 1 или 2 типа при приёме инсулина или пероральных сахароснижающих препаратов.

Для пересчёта концентрации глюкозы в мг/100 мл в единицы СИ (ммоль/л) используется следующая формула:

Глюкоза (мг/100 мл) х 0,0555 = Глюкоза (ммоль/л)

Рекомендуемая частота проведения исследования:

Американская Диабетическая Ассоциация рекомендует для пациентов, чья терапия была успешной (стабильный уровень углеводного обмена), проводить исследование HbA1c не реже 2-х раз в год, тогда как в случае изменения диеты или лечения следует увеличить частоту обследования до 4-х раз в год [7]. В Российской Федерации согласно Целевой Федеральной программе «Сахарный диабет» исследование HbA1c должно проводиться 4 раза в год при любом типе диабета [1].

Согласно рекомендациям Американской Диабетической Ассоциации женщины, больные сахарным диабетом, в период предшествующий беременности, нуждаются в специальном режиме мониторинга. Рекомендуется снизить уровень HbA1c для создания в организме будущей матери оптимальных условий для зачатия и развития плода. В начале HbA1cнеобходимо исследовать ежемесячно. Когда при соответствующей терапии углеводный обмен стабилизируется, исследование HbA1c необходимо проводить с интервалом 6 — 8 недель до момента зачатия [5, 6].

Современные исследования показали, что многие пациенты не соблюдают рекомендованный интервал между исследованиями [8], однако эксперты пришли к общему мнению, что регулярные исследования содержания HbA1c существенно снижают риск развития осложнений у больных сахарным диабетом.

Интерпретация результатов исследования:

Задачей сахароснижающей терапии при сахарном диабете является нормализация уровня глюкозы в крови. Исследования в рамках DCCT показали, что интенсивное лечение предохраняет пациента от развития отдалённых осложнений, таких как ретинопатия, нефропатия и нейропатия или значительно отодвигает срок их клинического проявления. Если пациенты строго придерживаются режима, направленного на нормализацию углеводного обмена, частота возникновения ретинопатии снижается на 75%, нефропатии — на 35-36%, на 60% уменьшается риск полинейропатий [10].

Ниже представлены терапевтические цели при лечении сахарного диабета по данным Целевой Федеральной программы «Сахарный диабет».

Терапевтические цели при лечении сахарного диабета 1 типа [1, 18]

источник

Определение гликозилированного гемоглобина в крови: суть методик

С целью определения состояния организма человека проводят лабораторные исследования. Для определения заболеваний, которые вызывают повышение или снижение углеводов в крови, осуществляют тест на определение уровня гликозилированного гемоглобина в крови. Это наиболее приемлемый анализ, который показывает достоверные результаты. Интерпретировать их может только лечащий врач. Поставив диагноз, он назначит лечение.

Методика определения гликозилированного гемоглобина в крови

Гликозилированный гемоглобин – связь эритроцита с углеводом. Она становится нерушимой. Поэтому врач может обнаружить показатель, который держится в крови на протяжении всей жизни эритроцитов (3 месяца). Подробно о том, что такое гликозилированный гемоглобин.

Для выявления содержания показателя сдают кровь на анализ. Для этого подходит венозная или капиллярная биологическая жидкость.

После взятия биологического материала в пробирку добавляют вещество, препятствующее сворачиванию крови. Если образуется сгусток, проведение дальнейшего исследования будет невозможным. Содержимое пробирки тщательно перемешивают, только после этого ставят в анализатор. Он автоматически высчитывает показатель, и выдает данные на бланке исследования.

Применение прибора исключает возможность врачебной ошибки в подсчете количества необходимых элементов. То есть такие данные будут наиболее достоверными. Но для подтверждения числа показателя рекомендуется проведение исследования дважды. При получении одинаковых показателей, тест считается достоверным.

Анализатор для определения гликозилированного гемоглобина

Выпущено множество моделей приборов, с помощью которых можно определить различные показатели биологических жидкостей человека. Существует множество аппаратов для определения гликозилированного гемоглобина.

• Жидкостный хроматограф. Кровь разделяется на несколько фракций, в которых исследуется заданный показатель.
• Ионнообменный хроматограф. Разделяет ионы на молекулы. После добавления различных реагентов возможно измерение определенных фракций. Примером такого прибора является анализатор для определения гликозилированного гемоглобина D10.
• Иммунотурбидтметрия. Определяет показатель посредством измерения состава крови при взаимодействии комплекса антиген-антитело.
• Портативные анализаторы. Подбираются каждым пациентом для домашнего использования. Для анализа необходимо небольшое количество капиллярной крови, которую получают посредством прокола кожи скарификатором. Прибор основан на фотометрии, измеряют длину волны. Каждая из них имеет флуоресценцию (свечение), по которой определяется точный результат показателя. Читай подробный обзор домашних анализаторов крови.

Если у пациента наблюдаются проблемы со здоровьем, его сахар в крови периодически повышается, врач рекомендует приобрести домашний анализатор. Наборы реагентов для определения гликозилированного гемоглобина должны быть просты в использовании, чтобы все пациенты могли их применять.

Наборы для определения гликозилированного гемоглобина

При покупке такого набора пациенты должны посмотреть, на какое количество тестов он рассчитан. Продаются анализаторы для 100, 200 тестов. Исследования показывают процентное количество исследуемого вещества. Применяют венозную или капиллярную кровь. Так как портативные приборы используются в домашних условиях, чаще всего применяют второй вариант.

Такие приборы необходимы для самостоятельного использования людям, у которых наблюдается нестабильный сахарный диабет. Они могут вовремя выявить отклонения биологической жидкости, при которых не помогают назначаемые лекарственные средства.

Реагенты для определения гликозилированного гемоглобина

В набор входят следующие реагенты, необходимые для хроматографии:

• средства, препятствующие сворачиванию крови, например, ЭДТА;
• гемолитические средства, уничтожающие эритроциты, оставляющие глюкозу;
• буферный раствор – жидкость, которая поддерживает кислотно-основное состояние раствора;
• раствор уксусной кислоты – жидкость, необходимая для удаления лишних компонентов в исследуемом материале;
• контрольный образец – необходим для сравнения полученного результата с нормой;
• полуавтоматический прибор, который представляет собой портативный анализатор.

Вышеперечисленные вещества могут быть различных фирм, но предназначение для них остается одинаковым. В каждый набор определения гликозилированного гемоглобина в крови входит инструкция по использованию.

Определение гликозилированного гемоглобина в цельной крови

Врач должен предупредить пациента, как сдавать тест на определение гликозилированного гемоглобина в цельной крови.

Для проведения теста в пробирку вносят вещество, которое препятствует сворачиванию крови. К нему добавляют цельную кровь. Соотношение должно быть одинаковымм. Полученный раствор тщательно перемешивают и настаивают. Так образуется эритроцитарная масса, которую пипеткой необходимо отобрать и переместить в пробирку, где расположен гемолитик. Полученную жидкость перемешивают и настаивают. В это время образуется процесс гемолиза, то есть эритроциты разрушаются, остается только глюкоза. Ее определяет прибор.

Определение гликозилированного гемоглобина в сыворотке крови

Сыворотка – субстанция крови человека, получаемая из цельной крови. Для этого образец помещают в пробирку и устанавливать в центрифугу. Она работает на больших оборотах. После истечения 10 минут прибор останавливают. Сверху пробирки остается желтоватая жидкость, которая является сывороткой. На одно осаждаются форменные элементы, поэтому эта часть будет иметь красный оттенок.

Ход тестирования проходит в несколько этапов:

• в пробирку добавляют сыворотку, раствор гемоглобина, осищенную воду;
• отдельно перемешивают контрольную пробу, состоящую из сыворотки и дистиллированной воды;
• обе емкости настаивают, после этого помещают в центрифугу на больших оборотах;
• сверху пробирки остается желтая часть жидкости, которую отбирают, и добавляют сульфат аммония.

Получилась жидкость из сыворотки крови, которую можно исследовать на фотоэлектроколориметре. Это прибор, который определяет длину волны. Полученные с него данные вставляют в формулу для выявления экстинкции. Она необходима для определения вещества на 1л крови.

Определение гликозилированного гемоглобина при сахарном диабете

Гликированный показатель определяется только в промежутке времени, равном 3 месяца. Поэтому исследование проводится единично. Возможно применение повторного анализа через несколько дней для подтверждения результатов. Но несмотря на это, полученные данные относятся к достоверным результатам. На их основании врач может судить о следующих параметрах:

• качество медикаментозного лечения, которое корректируют при получении плохих данных;
• нарушение пациентом правил поведения при гипергликемии, к которым относится употребление углеводов, активные физические нагрузки, нервное перенапряжение.

Важно! При гипергликемии рекомендуется периодически измерять уровень глюкозы с помощью домашнего глюкометра. Гликозилированный тест информативен только 1 раз в 120 дней.

Сахарный диабет – опасное заболевание, которое чревато осложнениями, снижающими уровень жизни пациента, или приводящими к его гибели. Рекомендуется вовремя применять медикаментозное лечение, придерживаться диеты. Определение гликозилированного гемоглобина позволяет врачу оценить качество терапии, скорректировать ее.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

источник

Гликозилированный гемоглобин

1 3R1 2х15мл+R2 1х10мл+R3 1х5мл

1 4´500 мл Гемолизирующий раствор к

Гемоглобин A1c (HbA1c) представляет собой гликозилированный гемоглобин (гликогемоглобин), образующийся в результате неферментативной реакции между глюкозой и исходным гемоглобином. Этот процесс непрерывно продолжается на протяжении всей циркуляции эритроцита в крови (средняя продолжительность жизни эритроцита составляет 100 – 120 суток). Степень гликозилирования прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови. Уровень HbA1c отражает средний уровень глюкозы в крови за предшествующие 6 – 8 недель (этот период подвержен влиянию концентрации глюкозы в большей степени, чем предшествующие ему недели, что обусловлено кинетикой эритроцитарного обмена). Тем самым, HbA1c может служить для долгопериодного ретроспективного мониторинга концентрации глюкозы в крови при сахарном диабете. Клинические исследования показали, что снижение уровня HbA1c может предотвратить или отсрочить наступление поздних осложнений диабета.

Поскольку количество HbA1c зависит также от общего количества гемоглобина, измеренное значение HbA1c указывается в процентах от концентрации общего гемоглобина.

Ошибочно низкие значения (низкий HbA1c при высоком уровне глюкозы в крови) могут наблюдаться при сниженном сроке жизни эритроцитов (гемолитические заболевания) или при значительной недавней потере крови (увеличение доли молодых эритроцитов). Ошибочно высокие значения (высокий HbA1c при нормальном уровне глюкозы в крови) обнаруживались при железодефицитной анемии (повышенный процент старых эритроцитов). При клинической интерпретации значений HbA1c следует принимать во внимание эти обстоятельства.

Иммунотурбидиметрический тест по конечной точке с сенсибилизацией частицами и непосредственным определением HbA1c без измерения общего гемоглобина.

Общий гемоглобин и HbA1c гемолизированной крови соединяются с латексными частицами реагента R1, обладая одинаковым сродством к ним. Для каждого из этих веществ связанное количество пропорционально концентрации в крови.

К связанному латексными частицами HbA1c присоединяются мышиные моноклональные антитела к человеческому HbA1c (реагент R2). Содержащиеся в реагенте R3 козьи поликлональные антитела к мышиному IgG взаимодействуют с мышиными антителами, что приводит к агглютинации. Измеряемое поглощение света пропорционально количеству HbA1c, связанному с латексными частицами, которое, в свою очередь, пропорционально проценту HbA1c в пробе.

Стандартизация

Тест стандартизирован согласно IFCC референсному методу [3]. Калибровка согласно DCCT/NGSP также возможна. Соответствующие значения калибраторов приведены во вкладыше набора калибраторов TruCal HbA1c.

Значения DCCT/NGSP и IFCC имеют линейную зависимость и могут быть вычислены относительно друг друга с помощью следующих формул:

IFCC = (HbA1c (NGSP) – 2,15) / 0,0915.

NGSP = 0,0915 х HbA1c (IFCC) + 2,15

IFCC: International Federation of Clinical Chemistry [3,4]

DCCT: Diabetes Control and Complications Trial [5]

NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Program [6]

Компоненты и их концентрации реакционной смеси

источник