Трансформирующий раствор для гемоглобина

КУПИТЬ

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Департамента государственного контроля

лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ

В.Е. Акимочкин

06.02.2002 г.

Рекомендована к утверждению

Комиссией по лабораторным реагентам

Комитета по новой медицинской технике МЗ РФ 

(протокол № 6 от 03.07.2001 г.)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом

НАЗНАЧЕНИЕ 

Набор Гем-Агат предназначен для количественного определения содержания гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом (метод Drabkin) с использованием гемоглобинометров типа «Минигем-540» в клинико-диагностических и биохимических лабораториях. 

Набор рассчитан на проведение 400 определений при расходе 5,0 мл рабочего раствора на один анализ.

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Гемоглобин крови при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в гемиглобин (метгемоглобин), образующий с ацетонциангидрином гемиглобинцианид (цианметгемоглобин), интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации гемоглобина в крови и измеряется фотометрически при длине волны 540 (520–560) нм.

СОСТАВ НАБОРА

1. Трансформирующий реагент – сухая смесь (натрий углекислый кислый, 1,0 г; калий железосинеродистый, 200 мг), 1,2 г – 2 упаковки.

2. Ацетонциангидрин, 0,5 мл – 2 ампулы.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейная область определения концентрации гемоглобина – в диапазоне от 20 до 200 г/л, отклонение от линейности – не более 2%.

Чувствительность определения – не более 10 г/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 2%.

Нормальные величины концентрации гемоглобина в крови составляют:

– у мужчин 130–160 г/л;

– у женщин 120–140 г/л.

Качество набора можно оценивать с использованием контрольных растворов гемоглобина Гемоглобин-Контроль (ООО «Агат-Мед») либо аналогичных контрольных растворов отечественного или зарубежного производства.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Потенциальный риск применения набора – класс 2а.

При работе с данным набором необходимо соблюдать правила техники безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений, утвержденной Минздравом СССР 17.01.91 г., и «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (М., 1981).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

В состав трансформирующего раствора входит ацетонциангидрин – ядовитое вещество. В случае попадания раствора на кожу и слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством проточной воды. Пипетирование per os категорически запрещается. При попадании внутрь следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

– Гемоглобинометр типа Минигем-540;

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

– колба мерная вместимостью 1,0 л;

– пробирки вместимостью 5–10 мл;

– секундомер;

– вода дистиллированная;

– перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Трансформирующий раствор. Содержимое одной упаковки трансформирующего реагента и одной ампулы ацетонциангидрина количественно перенести в мерную колбу вместимостью 1,0 л, растворить в небольшом количестве дистиллированной воды и довести объем дистиллированной водой до метки.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

В пробирки внести по 5,0 мл трансформирующего раствора, добавить по 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 20 минут.

При использовании гемоглобинометров дальнейшее определение провести в соответствии с инструкцией к прибору.

Окраска устойчива в течение 1 часа.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при комнатной температуре (+18–25° С) в течение всего срока годности.

Срок годности набора – 5 лет.

Трансформирующий раствор должен быть прозрачным, желтого цвета и может храниться в посуде из темного стекла при комнатной температуре (+18–25° C) не более 6 месяцев. При появлении осадка или при обесцвечивании раствор непригоден для употребления. Не замораживать!

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат–Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Регистрационные удостоверения

Назад к списку инструкций

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения гемоглобина в крови гемихромным методом 

НАЗНАЧЕНИЕ 

Набор предназначен для количественного определения содержания гемоглобина в крови гемихромным в клинико-диагностических и биохимических лабораториях. Набор рассчитан на проведение 1000 определений при расходе 5,0 мл рабочего раствора на один анализ. 

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Гемоглобин крови под действием поверхностно-активного вещества додецилсульфата натрия переходит в низкоспиновую окисленную форму — гемихром, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации гемоглобина в крови и измеряется фотометрически при длине волны 540 (500–560) нм.

СОСТАВ НАБОРА

1. Трансформирующий реагент, концентрат — (натрий додецилсульфат, 60 г/л) — 5 флаконов (по 10 мл).

2. Калибровочный раствор гемоглобина с концентрацией 120 г/л — 1 флакон (2 мл). 

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейная область определения концентрации гемоглобина — в диапазоне от 20 до 200 г/л, отклонение от линейности — не более 2%.

Чувствительность определения — не более 10 г/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 2%.

Нормальные величины концентрации гемоглобина в крови составляют: — у мужчин 130–160 г/л; — у женщин 120–140 г/л. Качество набора можно оценивать с использованием контрольных растворов гемоглобина отечественного или зарубежного производства. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе кровью и ее компонентами необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированные.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

— Спектрофотометр, длина волны 540 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 500–560 нм (зеленый светофильтр), кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;

— пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

— колба мерная вместимостью 1,0 л;

— пробирки вместимостью 5–10 мл;

— секундомер; — вода дистиллированная;

— перчатки резиновые или пластиковые. 

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Трансформирующий раствор. Содержимое одного флакона концентрата трансформирующего реагента количественно перенести в мерную колбу вместимостью 1,0 л и довести объем дистиллированной водой до метки. Допускается выпадение кристаллов додецилсульфата натрия в концентрате трансформирующего реагента при хранении. Выпавший осадок можно растворить, подогрев концентрат в горячей воде, либо он полностью раствориться при количественном переносе в мерную колбу. Если рабочий раствор трансформирующего реагента не становиться прозрачным после растворения концентрата в течение часа, то такой раствор не пригоден к применению.

Калибровочный раствор гемоглобина готов к применению.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

В пробирки внести по 5,0 мл трансформирующего раствора, добавить по 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 20 минут, после чего измерить величину оптической плотности опытных проб против холостой пробы (трансформирующего раствора) при длине волны 540 (500–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Калибровочный раствор гемоглобина обрабатывать так же, как и пробу цельной крови. Окраска устойчива в течение 1 часа. Концентрацию гемоглобина в крови рассчитать по формуле:

где: С — концентрация гемоглобина в опытной пробе, г/л;

       Eо — оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;

       Eк — оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

       120 — концентрация гемоглобина в калибровочном растворе, г/л. 

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25° С не более 5 суток.

Срок годности набора — 2 года.

Трансформирующий раствор должен быть прозрачным и может храниться при комнатной температуре не более 1 месяца. При появлении осадка раствор непригоден для употребления. 

Калибровочный раствор гемоглобина после вскрытия флакона может храниться в течение 6 месяцев, но не более срока годности набора, при хранении в укупоренном виде при температуре +2–8° С.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат—Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым — ст.н.с. Гематологического научного центра РАМН.

Назад к списку инструкций

УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»

М. П.

набора реагентов для определения гемоглобина

гемиглобинцианидным методом

Назначение

Область применения – клиническая медицина, клиническая биохимия. Определение содержания гемоглобина в крови.

Характеристики набора

Принцип метода

Гемоглобин окисляют железосинеродистым калием в гемиглобин. Образующийся при взаимодействии гемиглобина с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид определяют фотометрическим методом.

Состав набора

Смесь реактивов: 1. Калий железосинеродистый 0.4 г

Натрий углекислый кислый 2,0 г

  2. Ацетонциангидрин 1,0 мл

3. Калибровочный раствор гемоглобина

(концентрация указана на ампуле)

Аналитические и диагностические характеристики

Набор рассчитан на проведение 200-400 анализов содержания гемоглобина в пробах в зависимости от оборудования.

Меры предосторожности

Раствор содержит ядовитое вещество!

Во время работы с набором соблюдайте правила техники безопасности. Избегайте контакта раствора с кислотами. После окончания работы вымойте руки теплой водой с мылом. В случае попадания на кожу и слизистые рекомендуется сразу же смыть большим количеством воды. При попадании внутрь немедленно промыть желудок и обратиться к врачу.

Оборудование и материалы

Для проведения анализов содержания гемоглобина можно использовать фотоэлектроколориметры, спектрофотометры, а также любое автоматизированное оборудование.

Проведение анализа, регистрация результатов

Приготовление трансформирующего раствора

Смесь реактивов и ацетонциангидрин количественно перенести в мерную колбу вместимостью 2 л, довести до метки дистиллированной водой и тщательно перемешать.

Проведение анализа

Содержимое ампулы с калибровочным раствором гемоглобина выливают в кювету с толщиной слоя 1 см и измеряют оптическую плотность (Акалибр) при 540 нм относительно трансформирующего раствора (при +15 – +25 оС).

Определение гемоглобина в крови проводят следующим образом: 0.02 мл крови приливают к 5 мл трансформирующего раствора, смесь перемешивают и через 10 мин. измеряют оптическую плотность раствора (Апробы) относительно трансформирующего раствора

Концентрацию гемоглобина рассчитывают по формуле:

Гемоглобин (г/л) = Скалибр (Апробы / Акалибр)

где Скалибр – концентрация гемоглобина в калибровочном растворе,

Апробы – оптическая плотность пробы,

Акалибр – оптическая плотность калибровочного раствора.

Построение калибровочной кривой

Для точного построения калибровочной кривой лучше использовать набор растворов с различными концентрациями гемоглобина.

Если в наличии калибровочный раствор только одной концентрации, то калибровочную кривую можно построить следующим образом:

1)  из калибровочного раствора готовят серию растворов согласно таблице:

где С – концентрация гемоглобина в калибровочном растворе,

указанная на флаконе.

2) измеряют оптическую плотность растворов 1-3 относительно трансформирующего раствора и строят калибровочную кривую как зависимость оптической плотности от концентрации гемоглобина.

При помощи калибровочной кривой определяют концентрацию гемоглобина в пробе.

Примечание: если объем калибровочного раствора равен 3 мл, то растворы № 2 и № 3 можно получить из раствора № 1, (предварительно измерив А1), путем его разделения на 2 и 1 мл и переноса одного из объемов в другую кювету.

Нормальные величины: мужчины 125-175 г/л,

женщины 115-155 г/л.

Условия хранения калибровочного раствора

Хранение набора должно осуществляться при температуре 2-8 оС, не допуская воздействия прямых солнечных лучей, при комплектации набора калибровочным раствором. Не замораживать!

Начальник производства __________________

(подпись)

____________________________________________________________________________/________________Должность руководителя ЛПУ, (подпись, печать) (ФИО)

проводившего медицинские

испытания