Анализ крови проба вельтмана норма

Коагуляционная проба вельтмана

Значение метода: Сыворотку крови можно представить как коллоидную систему, устойчивость которых зависит от содержания белковых фракций крови и соотношения между ними. Повышенной устойчивостью обладают альбумины – белки, с малыми размерами молекул, выраженным электрич. зарядом и высокой степенью гидратации.

У глобулинов-большие размеры молекул сочетаются с меньшим зарядом и более низкой степенью гидратации. В связи с этими особенностями устойчивость глобулинов значительно ниже.

Коллоидная устойчивость сыворотки крови уменьшается при снижении фракции альбуминов , при заболеваниях печени (гепатит, цирроз, острая желтая атрофия печени), при гемолитических состояниях. Также считают, что коагуляционная проба снижена при повышении содержания гамма-глобулинов, снижающих стабильность сыворотки.

Увеличение пробы наблюдается при острых воспалительных и эксудативных процессах, когда увеличивается кол-во альфа- и бета- глобулинов, повышающих стабильность сыворотки.( эксудативная фаза ревматизма, активный процесс туберкулеза легких, злокачественных опухолей, больших потерях жидкости, острых инфекционных заболеваниях).

В клинико-диагностических лабораториях широко используют методы при которых реакциями коагуляции обнаруживают изменения в составе белков сыворотки крови. Одним из таких методов является коагуляционная проба Вельтмана.

Принцип метода: Устойчивость р-ров высокомолекулярных соединений (белков) зависит от 2-х факторов: величины заряда молекул и степени их сольватации.

В пробе Вельтмана для получения коагуляции белков сыворотки крови используется раствор СаСI2, который как электролит снижает заряд молекул и тепловую денатурацию, в результате которой молекулы белка приобретают гидрофобные свойства и теряют гидратную оболочку.

Ход работы: К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 4,9 мл дистил., воды, перемешивают и прибавляют 0,1 мл раствора СаСI2, встряхивают и нагревают на пламени до однократного

закипания. Охлаждают и на свету наблюдают за появлением коагуляции белка. Если белки не коагулировали, то добавляют еще 0,1 мл СаСI2 и вновь кипятят. Процедуру повторяют до тех

пор, пока не выпадут хлопья. Результаты оценивают, подсчитывая общее количество 0,5% раствора СаСI2 пошедшего на реакцию. В норме реакция наступает при добавлении 0,4- 0,5 мл СаСI2.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №18

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ГЕМОГЛОБИНА МЕТОДОМ ЩЕЛОЧНОЙ ДЕНАТУРАЦИИ

Значение метода: У детей при рождении количество гемоглобина выше, чем у взрослого (60-70%). Нв у новорожденного составляет фетальный гемоглобин и 30-40% Нв (взрослого типа). После рождения фетальный гемоглобин убывает и к 5-6 месяцам жизни составляет 1-2 % всего Нв.

Фетальный Нв отличается от взрослого рядом свойств: он растворяется при более высоких концентрациях солей, более устойчив к щелочам, имеет другую электрофоретическую подвижность.

Определение фетального гемоглобина имеет большое значение не только у детей, но и у взрослых при различных патологических состояниях, например при гипоксиях (пневмонии, инфаркте миокарде, гепатите, хроническом бронхите и др).

Принцип метода: Основан на большой устойчивости фетального Нв к щелочам.

Ход работы: В пробирку отмеряют 4,9 мл 0,04% р-ра NН4ОН и 0,1 гемолизата. Жидкость встряхивают 2-3 мин. Оптическую плотность определяют с зеленым светофильтром в кювете на 0,3 см против воды. Количество Нв определяют по калибровочному графику в г/л.

Норма = 130-185г/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №19

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА МЕТОДОМ ИЕНДРАШЕКА

Значение метода: Для дифференциальной диагностики желтух необходимо определить, за счет какой фракции возникает билирубинемия.

Принцип метода: при добавлении кофеинового реактива к сыворотке весь билирубин переходит в диссоциированное состояние и дает розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом. Без добавления кофеинового реактива окрашивание с диазореактивом дает только холебилирубин. По интенсивности окраски определяют светопоглащение.

Ход работы:

Для развития окраски общего билирубина пробу оставляют на 20 минут. Холебилирубин колориметрируют через 10-15 минут после добавления смеси. При более длительном стоянии в реакцию вступает гембилирубин. Обе пробирки колориметрируют против контроля в кюветах на 0,5 см с зеленым светофильтром. Количество гембилирубина определяют по разности общего и холебилирубина.

Норма: общий 4,2-20,5 мкМоль/л, холебилирубин 1,0-5,2мкМоль/л.

Гембилирубин 3,2-15,4 мкМоль/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №20

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА

Значение метода: Определение Са крови имеет большое значение (клиническое). Са определяют при рахите, при спазмофилии, при костных заболеваниях, при некоторых заболеваниях почек. При рахите также определяют коэффициент (Са/Р), в норме он равен 1,9-2 а при рахите увеличивается до 3 и более.

Принцип метода: мурексид образует с ионами Са в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно- фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании раствором более сильного комплексо-образователя трилона Б, этот комплекс разрушается, что приводит к изменению окраски, свойственной свободному мурексиду (бледно-сиреневой).

Ход работы: в стаканчик вносят 50 мл дистил. воды, 10 капель 9н р-ра NаОН и прибавляют несколько крупинок мурексида. Сразу появляется бледно-сиреневое окрашивание, обусловленное свободным мурексидом.

Приблизительно половину раствора переливают в другой чистый стаканчик и эта часть служит эталоном окраски свободного мурексида. К оставшейся части р-ра добавляют 1мл сыворотки, что приводит к появлению бледно- розового окрашивания, обусловленного образованием кальциево-мурексидного комплекса.

Раствор немедленно титруют трилоном Б до возращения прежней окраски индикатора. Конец титрования устанавливают путем сопоставления опытной и контрольных проб.

С тр.Б х V тр. Б 3,6мэкв/л Vтр Б

С Са= —————————– = ———————

Vсыв 1мл

Vтр.Б- Обьем трилона Б, пошедший на титрование.

Норма: Са=4,5-6,0 мэкв/л

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №21

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Значение метода: Гиперфосфатемия встречается при почечной недостаточности, гипопаратиреозе, акромегалии, при гипервитаминозе Д, костных заболеваниях, туберкулезе, диабете, кетозе, повышенной мышечной работе, при молочной диете. Гипофосфатемия наблюдается при гиперпаратиреозе, остеомаляции, пеллагре, длительном лечении инсулином и хлористым кальцием, при нарушении всасывания фосфатов, Д- авитаминозном рахите.

Принцип метода: Неорганический фосфор при взаимодействии с (NН4)2МоО4 образует фосфорно-молибденовую кислоту, которая восстанавливается аскорбиновой кислотой до синего фосфорно-молибденового комплекса. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации неорганического фосфора.

Ход работы: К 4мл. дист.воды прилить 1мл сыворотки и 5мл трихлоруксусной кислоты (ТХУ), через 10 минут фильтруют. К 5мл фильтрата добавляют 1мл (NН4)2МоО4 и 1,8мл дистил.воды,

0,2 мл аскорбиновой кислоты. Через 20 минут колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром относительно дист. воды. Количество неорганического фосфора определяют по калибровочной кривой. Норма: 1,8- 2,4 мэкв/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №22

Качественные реакции на неорганические и органические составные части мочи.



Источник: https://infopedia.su/12xcdc.html

Персональный сайт – Пробы коллоидоустойчивости

 Пробы коллоидоустойчивости

В клинико-диагностических лабораториях находят примене­ние методы, позволяющие с использованием простых коллоид­ных реакций выявлять изменения в белковом спектре сыворотки крови.

В силу этого они получили известность под названием проб коллоидной устойчивости, или проб на лабильность белков сыворотки.

Поскольку нарушение коллоидной устойчивости сы­воротки под действием какого-либо реактива выражается снача­ла коагуляцией (склеиванием), а затем флокуляцией (осажде­нием), коллоидноустойчивые пробы именуют нередко коагуляционными, или флокуляционными (коллоидноосадочными).

Флокуляция (коагуляция, осаждение) наступает мод влияни­ем двух основных факторов: 1) уменьшения электрического за­ряда коллоидных частиц (и, следовательно, содержания гидратационной воды в их оболочке); 2) увеличения размеров коллоид­ных частиц.

Преципитацию  коллоидных  частиц  вследствие  уменьшения толщины сальватационной оболочки белковых молекул обычно вызывают действием ацетона, алкоголя, концентрированных растворов электролитов.

Положительный результат коллоидно-химических проб чаще всего обусловлен характерными количественными изменениями в  содержании   отдельных  фракций                    α-,  β-,  γ-глобулинов  либо уменьшением соотношения альбумин/глобулины.

  В случае от­сутствия сдвигов в показателях концентрации глобулинов и ко­эффициента альбумин/глобулины известное значение имеет воз­растание    содержания    более    грубо   дисперсных    подфракций (γ-глобулинов) в глобулиновой системе.

Тимоловая проба.

Принцип метода: при добавлении буферного раствора тимола (рН=7,55 при 250С) к сыворотке крови часть крупнодисперсных белков осаждаются, вызывая помутнении раствора, интенсивность которого измеряется.

Реактивы:

1. рабочий раствор (7,5 мл концентрированного раствора довести до 500 мл дистиллированной водой).

2. физиологический раствор.

Исследуемый материал:

1. негемолизированная сыворотка крови.

Ход определения:

Опытную и контрольную пробу перемешать и оставить стоять при комнатной температуре на 30 минут; измерить на ФЭКе при длине волны 670 нм, кювета 5 мм; опытную пробу измерить против контроля.

Норма: 0 – 5 единиц.

Клинико-диагностическое значение:  высокие цифры (единицы) тимоловой пробы отмечаются при острых гепатитах, циррозах печени в стадии обострения. Увеличенные цифры после перенесенного гепатита свидетельствуют о том, что патологический процесс в печени полностью не прекратился.

Проба Вельтмана

            Принцип метода: белки сыворотки крови в результате нагревания и действия раствора CaCl2  определенной концентрации выпадают в осадок в виде хлопьев.

            Реактивы:

раствор CaCl2 0,5% (готовится из ампульного, учитывая, что 10% ампульный раствор имеет удельный вес 1,040 который соответствует 5% безводному).

Исследуемый материал:

негемолизированная сыворотка крови.

Ход определения:

      К 0,1 мл сыворотки прибавляют 4,9 мл дистиллированной воды и 0,1 мл 0,5% раствора CaCl2. Опытную пробу перемешивают. Нагревают над пламенем горелки до однократного вскипания смеси. Остужают (под струей воды). Пробу смотрят на свет, если хлопьев нет, то в эту же пробирку добавляют еще 0,1 мл 0,5% раствора CaCl2. Вновь кипятят. Процедуру повторяют пока не выпадают хлопья.

      Интерпретация результатов:  результат оценивают, подсчитывая общее количество пошедшего на титрование CaCl2.

      Норма: 0,4 – 0,5 мл CaCl2.

Клинико-диагностическое значение: реакция коагуляции белков сыворотки может изменяться в двух направлениях: в сторону увеличения или уменьшения количества раствора CaCl2 пошедшего на реакцию. Применяют «сдвиг вправо» (уменьшение количества CaCl2 для реакции) и «сдвиг влево» (увеличение количества CaCl2 для реакции).

      Сдвиг вправо: отмечается при болезни Боткина, острой желтой атрофии печени, циррозах, многих воспалительных заболеваниях (пневмония, плеврит, туберкулез легких).

      Сдвиг влево: обнаруживается при острых воспалительных и экссудативных процессах – остром ревматизме, нефрозах, злокачественных опухолях, больших потерях жидкости и др.

Источник: https://bioximia.narod.ru/index/0-155