Измерение гемоглобина фотометрическим методом
2.3.1 Унифицированный метод определения количества гемоглобина на гемоглобинометре фотометрическом портативном МиниГЕМ
Принцип метода: Основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (р-р Драбкина). Под влиянием железисто – синеродистого калия гемоглобин окисляется до метгемоглобина (гемоглобина), который затем превращается при помощи калия в цианметгемоглобин (гемоглобинцианид).
Реактивы: 1) Трансформирующий р-р
Устройство: Гемоглобинометр МиниГЕМ 540 представляет собой специализированный фотометр, предназначенный для определения общего гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом с фотометрированием на длине волны 540 нм.
Диапазон измеряемой прибором оптической плотности составляет от 0 до 0,9. Б, что соответствует концентрации общего гемоглобина крови от 0 до 360 г/л. В приборе используется стандартная проб подготовка – 20 мкл крови, разведение 1:250. Суммарная погрешность определения гемоглобина (с учетом погрешностей дозаторов и погрешностей биохимического метода), полученная при сравнительных медицинских испытаниях, не превышает 2% (коэффициент вариации) во всем диапазоне измеряемых концентраций. При этом собственная погрешность гемоглобинометра как фотометра – не более 1%, а воспроизводимость, оцененная по коэффициенту вариации, – не более 0,25%.
Два фактора обеспечивают это качество прибора:
высокая воспризводимость характеристик раствора гемиглобинцианида, который сохраняет свои свойства при надлежащем хранении долгие годы, в т. ч. коэффициента пересчета оптической плотности в концентрацию гемоглобина (или фактора калибровки);
конструкция гемоглобинометра МиниГЕМ 540 обеспечивает высокую надежность фотометрических параметров прибора. МиниГЕМ 540 снабжен функцией саморегулирования, он обладает многолетней стабильностью измерений.
Другая отличительная особенность гемоглобинометра – полностью автоматизированная процедура фотометрирования.
Для определения гемоглобина достаточно опустить кювету с фотометрической пробой в прибор, и через мгновенье на дисплее отобразится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию производится автоматически. Перед измерением прибор не нужно включать, “прогревать”, подстраивать или калибровать. Гемоглобинометр автоматически выключится при вынимании кюветы до следующего измерения.
Третья особенность гемоглобинометра МиниГЕМ 540 – его портативность и низкое энергопотребление.
Масса прибора без батарей не превышает 300 г. Питание от сети через адаптер или от встроенных батарей. Ресурс батарей – 1 000 000 измерений, или 4 года работы.
Для контроля работоспособности гемоглобинометра используется контрольная стеклянная мера, паспортизованная для каждого прибора. Внутрилабораторный и внешний контроль качества может проводиться с помощью обычных контрольных материалов -контрольных растворов гемоглобина.
Методика измерений:
подготовить пробирки, поместив в каждую из них по 5 мл трансформирующего раствора (раствор Драбкина);
во время взятия крови в каждую пробирку перенести по 20 мкл капиллярной крови( 0,02 мл пипеткой Сали) и тщательно перемешать раствор;
через 20 мин каждую пробирку перед измерением перемешать путем переворачивания пробирки вверх вниз (время лизирования) и провести серию измерений:
Учет результата:
перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки;
опустить оптическую кювету в фотометрическую ячейку прибора, при этом автоматически произойдет фотометрирование реакционной смеси, сопровождаемое звуковым сигналом, и на индикаторе появится число, соответствующее концентрации гемоглобина;
записать результат измерения.
2.3.2 Унифицированный метод определения концентрации гемоглобина на мини -фотометре MF-1020
Введение: мини фотометры являются миниатюрными настольными приборами для измерения гемоглобина крови.
Особенности прибора: цифровой индикатор, кювета открытого типа, относительная устойчивость к светорассеиванию, двухканальная оптическая схема.
Прибор показывает концентрацию гемоглобина в г/л. Светопоглощение зеленого света с длиной волны(546 нм) раствором гемиглобинцианида напрямую переводятся в единицы измерения гемоглобина. Настройка и калибровка прибора осуществляется при помощи двух ручек – « ZERO» и «CAL» . К прибору прилагается светофильтр (калибратор), назначение которого – убедиться в исправности оптических и электронных узлов и калибровки минифотометра.
Масса прибора 1 кг 300 гр.
Порядок измерения:
1.Включите прибор.
2.В течение 10 мин прогрейте.
3.Убедитесь в том, что прибор правильно откалиброван.
4.Установите кювету с холостой пробой реагента трансформирующего раствора. 5.С помощью ручки « ZERO» на цифровом индикаторе установите нулевое значение. 6.Приготовьте кровь, разбавив ее 1:251 с трансформирующим раствором и проведите измерение.
Приготовление пробы:
1 .Двадцать микрометров крови (0,02 мл) необходимо разбавить в 5 ,0 мл трансформирующего раствора р-ра Драбкина- 1:21
2.Хорошо перемешайте (встряхните). Прежде чем приступить к измерению, подождите 5-10 мин, особенно если реагент не содержит детергент.
Калибровка минифотометра по стандартному р-ру гемиглобинцианида
Вставьте кювету, содержащую трансформирующий реактив (р-р Драбкина) в кюветный отсек.
При помощи ручки « ZERO» установите нулевое значение в цифровом табло.
Вставьте кювету, содержащую стандартный р-р гемиглобинцианида, в кюветный отсек.
При помощи ручки « CAL» установите данное значение стандартного калибровочного р-ра в цифровом табло (пример 150 г/л).
Повторите процедуру калибровки от пункта 1 до пункта 4.
Калибровка окончена, и Вы можете приступить к измерению
Калибровка минифотометра при помощи калибратора (по фактору)
1.Вставьте калибратор со светофильтром в кюветный отсек таким образом, чтобы была
видна надпись «ZERO» с цифровым значением (например, 0.1.6)
2.При помощи ручки «ZERO» установите это значение (п.п.0.1.6) в цифровом табло.
3.Переверните калибратор и вставьте его в кюветный отсек таким образом, чтобы
была видна надпись «CAL» с калибровочным значением (пример 159).
4.При помощи ручки «CAL» установите данное значение на цифровом табло.
Повторите процедуру от пункта 1 до пункта 4.
Калибровка окончена, и Вы можете приступать к измерениям.
Требования к реактивам:
1.Любая модификация р-ра пригодна для применения.
2.Разбавление 10 мкл крови в 2,5 мл трансформирующего не пригодно для этой модели.
3.Можно приготавливать самим р-р-1 раз в месяц, хранится в посуде из темного стекла.
2.3.3 Унифицированный метод определения гемоглобина на фотоэлектроколориметре
Принцип метода: Гемоглобин, взаимодействуя с ацетонциангидрином, в присутствии железосинеродистого калия K3[Fe(CN)6] образует гемиглобинцианид красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина в пробе крови.
Реактивы: 1) трансформирующий раствор (0,5 мл ацетонциангидрина, 0,2 г железосинеродистого калия, 1 г гидрокарбоната натрия NaHCb растворяют в 1 л дистиллированной воды; реактив стоек, хранится в посуде из темного стекла); 2) стандартный раствор гемиглобинцианида (раствор, выпускаемый фирмой «Ренал», содержит 59,75 мг% гемиглобинцианида; раствор фирмы «Иммуна» —64,23 мг%. Это соответствует концентрации гемоглобина в крови 150 и 154 г/л при разведении ее в 251 раз).
Ход определения. К 5мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл (капилляр Сали) крови. При этом кровь разводится в 251 раз. Оставляют пробирки на 20 мин при комнатной температуре.
Фотометрируют при зеленом светофильтре (длина волны 540 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм (1 см) против дистиллированной воды.
Стандартный раствор фотометрируют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет. Содержание гемоглобина определяют по калибровочному графику, который строится по стандартному раствору гемиглобинцианида или по формуле:
С=Е о/ Е к х 120
Где С- концентрация гемоглобина в опытной пробе, г/л
Ео – оптическая плотность опытной, ед. опт. Плотность
Ек- оптическая плотность калибровочной пробы, ед.плот.
120-концекнтрация гемоглобина кВ калибровочном растворе, г/л.
Приготовленные разведения фотометрируют. против дистиллированной воды («холостая» проба).
Â.Ì.Äàâûäîâ, Å.Í.Îâàíåñîâ, È.Â.Ñåöêî
Ê ÂÎÏÐÎÑÓ Î ÒÎ×ÍÎÑÒÈ ÔÎÒÎÌÅÒÐÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÊÎÍÖÅÍÒÐÀÖÈÈ ÃÅÌÎÃËÎÁÈÍÀ
Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííîå ïðåäïðèÿòèå “Òåõíîìåäèêà”,
Ìîñêâà
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ êîíöåíòðàöèè ãåìîãëîáèíà ôîòîìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì êðîâü îáðàáàòûâàþò, êàê ïðàâèëî, â òðàíñôîðìèðóþùåì ðàñòâîðå, ÷òîáû ïîäãîòîâëåííàÿ äëÿ ôîòîìåòðèðîâàíèÿ ïðîáà èìåëà îïðåäåëåííûå îïòè÷åñêèå ïàðàìåòðû. Êðîìå îïòè÷åñêîé ïðîçðà÷íîñòè, âàæíîå çíà÷åíèå èìååò ñïåêòðàëüíûé ñîñòàâ æèäêîñòè. Èìåííî ñïåêòðàëüíûé ñîñòàâ ïðîáû îïðåäåëÿåò ñïîñîá ôîòîìåòðèðîâàíèÿ è òî÷íîñòü îïðåäåëåíèÿ êîíöåíòðàöèè ãåìîãëîáèíà. Âûáîð òðàíñôîðìèðóþùåãî ðàñòâîðà ìîòèâèðóåòñÿ êàê òðåáîâàíèÿìè ê íàäåæíîñòè èçìåðåíèé, òàê è ê óäîáñòâó è ê áåçîïàñíîñòè ðàáîòû ñ íèì.  60-õ ãîäàõ â ëàáîðàòîðíîé ïðàêòèêå èñïîëüçîâàëñÿ îêñèãåìîãëîáèíîâûé ìåòîä ñ òðàíñôîðìèðóþùèì ðàñòâîðîì 0,04% àììèàêà â âîäå è ôîòîìåòðèðîâàíèåì íà äëèíå âîëíû 540 íì. Âðåìÿ ïîäãîòîâêè ôîòîìåòðè÷åñêîé ïðîáû ñîñòàâëÿåò 1-2 ñ. Ïðè ýòîì ìåòîäå ïðîáà ñîäåðæèò íåñêîëüêî ïðîèçâîäíûõ ãåìîãëîáèíà, èìåþùèõ ðàçëè÷íûé ñïåêòð ïîãëîùåíèÿ – îêñèãåìîãëîáèí, êàðáîêñèãåìîãëîáèí. ìåòãåìîãëîáèí è ñóëüôîãåìîãëîáèí. Íåñìîòðÿ íà òî ÷òî ïðè ðÿäå çàáîëåâàíèé è îñîáåííî ïðè îòðàâëåíèè àíèëèíîì è åãî ïðîèçâîäíûìè ñóëüôîãåìîãëîáèí ìîæåò íàêàïëèâàòüñÿ â êðîâè, åãî âëèÿíèå ñ÷èòàåòñÿ íåçíà÷èòåëüíûì. Ñðåäè äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ îêñèãåìîãëîáèí è êàðáîêñèãåìîãëîáèí èìåþò îäèíàêîâîå ïîãëîùåíèå íà äëèíå âîëíû 540 íì, íà êîòîðîé è ïðîâîäèëèñü èçìåðåíèÿ. Îäíàêî ó ìåòãåìîãëîáèíà íà ýòîé äëè íå âîëíû ïîãëîùåíèå äðóãîå, è ðåçóëüòàò ôîòîìåòðè÷åñêîãî èçìåðåíèÿ çàâèñèò îò ñîîòíîøåíèÿ ïðîèçâîäíûõ â ïðîáå. Ê òîìó æå ýòî ñîîòíîøåíèå èçìåíÿåòñÿ âî âðåìåíè, òàê êàê îêñèãåìîãëîáèí ïåðåõîäèò â ìåòãåìîãëîáèí.
Íà ñìåíó îêñèãåìîãëîáèíîâîìó ìåòîäó ïðèøåë ðåêîìåíäîâàííûé ÂÎÇ ãåìèãëîáèíöèàíèäíûé ìåòîä, èñïîëüçóþùèé äëÿ ôîòîìåòðèðîâàíèÿ ðàñòâîð ãåìèãëîáèíöèàíèäà – ôîðìó, â êîòîðóþ ïåðåâîäÿòñÿ îñíîâíûå ïðîèçâîäíûå ãåìîãëîáèíà, êðîìå, îïÿòü æå, ñóëüôîãåìîãëîáèíà. Ðàñòâîð ãåìèãëîáèíöèàíèäà ñòîéêèé âî âðåìåíè è èìååò ìàêñèìóì ïîãëîùåíèÿ íà äëèíå 540 íì, íà êîòîðîé è ïðîèçâîäèòñÿ ôîòîìåòðèðîâàíèå. Òî÷íîñòü ìåòîäà 2% áåç ó÷åòà âëèÿíèÿ ñóëüôîãåìîãëîáèíà, ÷òî äîñòàòî÷íî äëÿ øèðîêîé ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêè. Íåäîñòàòêîì ìåòîäà ÿâëÿåòñÿ íàëè÷èå â òðàíñôîðìèðóþùåì ðàñòâîðå âðåäíûõ öèàíèñòûõ ñîåäèíåíèé è äëèòåëüíîå (äî 20 ìèí) âðåìÿ ðåàêöèè.
 òî æå âðåìÿ îêñèãåìîãëîáèíîâûé ìåòîä â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ äàåò ðåçóëüòàòû, íå óñòóïàþùèå òàêîâûì ãåìèãëîáèíöèàíèäíîìó. Àâòîðû èçó÷èëè òî÷íîñòíûå õàðàêòåðèñòèêè îêñèãåìîãëîáèíîâîãî ìåòîäà ïðè ôîòîìåòðèðîâàíèè íà äëèíå âîëíû 523 íì â óçêîé ñïåêòðàëüíîé ïîëîñå 10 íì.  ýòîì ñëó÷àå îêñè- è ìåòïðîèçâîäíûå ãåìîãëîáèíà èìåþò îäèíàêîâûé ìèëëèìîëÿðíûé êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ 7,12 è ôàêòîð ïåðåõîäà ñî âðåìåíåì îêñèôîðìû â ìåòôîðìó íå èçìåíÿåò îïòè÷åñêîãî ïîãëîùåíèÿ ïðîáû. Êàðáîêñèãåìîãëîáèí òàêæå ÿâëÿåòñÿ óñòîé÷èâîé ôîðìîé, íî èìååò íà ýòîé äëèíå âîëíû äðóãîé êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ – 10,3, è ýòî ìîæåò áûòü èñòî÷íèêîì îøèáêè èçìåðåíèÿ ïðè íàëè÷èè â ïðîáå ýòîé ôîðìû. Íàøè ñïåêòðîìåòðè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ðàñòâîðîâ êðîâè ïîêàçàëè, ÷òî ïðè ðàçâåäåíèè êðîâè ñëàáûì ðàñòâîðîì àììèàêà ÷àñòü êàðáîêñèãåìîãëîáèíà âñå æå îêèñëÿåòñÿ ïîä âëèÿíèåì ñèëüíîãî ðàçëè÷èÿ ïàðöèàëüíîãî äàâëåíèÿ ÑÎ â êðîâè è â ðàñòâîðå, ãäå åãî ôàêòè÷åñêè íåò. Îñòàâøàÿñÿ ÷àñòü âíîñèò ìåòîäè÷åñêóþ îøèáêó, ðàâíóþ ïðèìåðíî 1/6 îò ïðîöåíòíîãî ñîäåðæàíèÿ êàðáîêñèãåìîãëîáèíà â êðîâè. Ðåçóëüòàòû ñïåêòðîìåòðè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ïîäòâåðäèëèñü ïðè èçìåðåíèÿõ íà ãåìîãëîáèíîìåòðå “ÌèíèÃÅÌ-523”, â êîòîðîì ðåàëèçîâàíà ìåòîäèêà ôîòîìåòðèðîâàíèÿ íà äëèíå âîëíû 523 íì â óçêîé ñïåêòðàëüíîé ïîëîñå. Ïîÿâëåíèå êàðáîêñèãåìîãëîáèíà â êðîâè ñâÿçàíî, êàê ïðàâèëî, ñ îòðàâëåíèåì óãàðíûì ãàçîì âî âðåìÿ êóðåíèÿ èëè ïîæàðîâ. Ñîäåðæàíèå êàðáîêñèãåìîãëîáèíà â êðîâè ìíîãî êóðÿùèõ ïàöèåíòîâ ñîñòàâëÿåò 3-5%; ïðè îòðàâëåíèè óãàðíûì ãàçîì ñ ñèìïòîìàìè ðàñøèðåíèÿ êîæíûõ ñîñóäîâ è íàïðÿæåíèåì âî ëáó – 10%; ñ ñèìïòîìàìè ðåçêîé ãîëîâíîé áîëè, óñòàëîñòè, ãîëîâîêðóæåíèÿ, îñëàáëåííîãî çðåíèÿ, òîøíîòû, ðâîòû – 30%, ñ ñèìïòîìàìè êîìû, êîíâóëüñèé, äûõàíèÿ Cheyne-Stokes – 50%.
Ýòî îçíà÷àåò, ÷òî äëÿ âñåõ ñëó÷àåâ, íå ñâÿçàííûõ ñ ñèëüíûì îòðàâëåíèåì óãàðíûì ãàçîì (áîëåå 12%), ìåòîäè÷åñêàÿ îøèáêà èçìåðåíèÿ èññëåäóåìûì ìåòîäîì íå ïðåâûøàåò 2%, êàê è â ãåìèãëîáèíöèàíèäíîì ìåòîäå. Ó÷åñòü çàâûøåíèå ðåçóëüòàòîâ èçìåðåíèÿ â ñëó÷àÿõ îòðàâëåíèÿ äîñòàòî÷íî ïðîñòî, îðèåíòèðóÿñü íà âíåøíèå ïðèçíàêè îòðàâëåíèÿ.
Òàêèì îáðàçîì, ìîäèôèöèðîâàííûé îêñèãåìîãëîáèíîâûé ìåòîä, íå óñòóïàÿ â îñíîâíîì ãñìèãëîáèíöèàíèäíîìó ìåòîäó ïî òî÷íîñòè èçìåðåíèÿ, îáëàäàåò òàêèìè ïðåèìóùåñòâàìè, êàê ìàëîå âðåìÿ ïîäãîòîâêè ôîòîìåòðè÷åñêîé ïðîáû (2 ñ) è îòñóòñòâèå â òðàíñôîðìèðóþùåì ðàñòâîðå âûñîêîòîêñè÷íûõ âåùåñòâ.
ÍÎÂÎÑÒÈ
ÀÑÑÎÖÈÀÖÈß
ÎÁÐÀÇÎÂÀÍÈÅ
ÍÀÓÊÀ
ÁÈÁËÈÎÒÅÊÀ
ÍÎÐÌÀÒÈÂÛ
ÎÁÚÅÄÈÍÅÍÈß
ÎÑÍÀÙÅÍÈÅ
ÊÀ×ÅÑÒÂÎ
Методика определения уровня гемоглобина крови. Норма гемоглобина
Дозировка гемоглобина имеет первостепенное значение для оценки эритроцитного раздела, поскольку представляет собой функциональный элемент. Учитывая тот факт, что гемоглобин в чистом состоянии получается весьма трудно, и как таковой не подлежит дозировке, в текущей практике применяются косвенные методы дозировки.
Среди многочисленных существующих способов наиболее простым и точным методом гемоглобинометрии считается фотометрическое определение в виде цианметгемоглобина, а для эталонирования фотометров — использование стандартных растворов цианметгемоглобина, приготовленных из человеческого гемоглобина.
Принципы определения гемоглобина в крови. Железосинеродистый калий окисляет железистое железо гемоглобина, в результате чего все виды гемоглобина крови преобразуются в метгемоглобин. Последний комбинируется с цианистым калием, образуя цианметгемоглобин или циангемоглобин — наиболее устойчивое производное гемоглобина.
Состав используемого реагента следующий (по van Kampen-Zijlstra):
– Железосинеродистый калий [K3Fe(CN)6] 0,2 г
– Цианистый калий (KGN) 0,05 г
– Монокалиевый фосфат (КН2РО4) 0,14 г
– Дистилированная вода до 1000 мл
Показатель водорода реагента должен укладываться в пределы от 7,2 до 7,5, быть прозрачным и очень стойким. После приготовления раствор пропускается через качественный бумажный фильтр и хранится в герметически закрытых баллонах коричневого цвета, в холодильнике при температуре +4°. Хранить не более 1—2 месяцев. Периодически проверять чистоту раствора, в случае необходимости повторно фильтровать.
Раствор нетоксичен, поскольку концентрация цианистого калия значительно меньше ядовитой дозы.
Техника определения гемоглобина в крови. Влить 0,02 мл крови (содержащийся в одной пипетке гемоглобин) в пробирку с 5 мл реагента, перемешать и отставить на 20 мин. Прочет результата делать с помощью фотометра с фильтром S53 в ванночке, величиной 1 см, по сравнению с дистилированной водой.
Концентрация гемоглобина (в г/100 мл крови) определяется по формуле: Гемоглобин в г/100 мл = экстикция пробы х К(стандартная концентрация гемоглобина/стандартная экстинкция).
Калибровка фотометров осуществляется с помощью стандартного раствора гемоглобина, который у нас в стране поставляется бухарестским гематологическим Центром. Способ простой, точный, погрешность минимальная (±2%), воспроизводимость удовлетворительная.
Нормальные значения колеблятся в зависимости от возраста, пола высоты над уровнем моря.
У взрослого: мужчин = 15 ± 2 г/100 мл, а женщин = = 13 ± 2 г/100 мл.
У детей от двухлетнего возраста до половозрелости значения растут прогрессивно от 11 до 13 г/100 мл.
– Также рекомендуем “Методика определения уровня гематокрита крови. Норма гематокрита”
Оглавление темы “Гематология”:
- Показания для переливания цельной крови
- Показания для переливания эритроцитарной массы – способы получения
- Показания для переливания гранулоцитов (лейкоцитов) – способы получения
- Показания для переливания лимфоцитов
- Показания для переливания тромбоцитов – способы получения
- Показания для пересадки костного мозга – техника
- Забор венозной крови для анализов – гемограммы
- Методика определения уровня гемоглобина крови. Норма гемоглобина
- Методика определения уровня гематокрита крови. Норма гематокрита
- Методика подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов с помощью гемоцитометра
Определение количества гемоглобина проводится методом колориметрии по Сали, когда сравнивают интенсивность окраски образца крови пациента и теста. Более усовершенствованный способ – гемихромный, для него не нужны реактивы с цианистым калием.
Большая точность у спектрофотометрии, она предусматривает облучение светом сыворотки крови после добавления реактивов. Прибор фиксирует непоглощенную часть, на таком же принципе работают портативные гемоглобинометры.
Исследование необходимо для выявления анемии (низких показателей), чаще всего она возникает при нехватке железа, но возможно и поражение костного мозга, разрушение эритроцитов. Повышенное количество гемоглобина тоже опасно, так как в густой крови чаще образуются тромбы, закупоривающие сосуды. Высокий гемоглобин может указывать на хронические заболевания сердца, легких, выраженное обезвоживание.
Принцип определение количества гемоглобина
Количество гемоглобина в крови определяется двумя способами – спектрофотометрия (точный, но дорогой) и колориметрия (более простой). Второй вариант в лабораториях выполняется при помощи трех разных методик:
- гемиглобинцианидная,
- гемихромная,
- гемиглобиназидная.
Вне зависимости от способа измеряется гемоглобин в крови в г/л.
Принцип определение количества гемоглобина
Гемоглобин может менять свою структуру, окисляться и превращаться в метгемоглобин, тогда обычная методика определения не подходит. Для этого нужно провести количественную фотометрию по цианидному методу Эвелин-Маллой. Он основан на способности связывания гемоглобина с цианидами и превращения в цианогемоглобин. Окисленный не вступает в эту реакцию.
Поэтому будет разница в результате между обычной формой и метгемоглобином. По ней и рассчитывают концентрацию.
Есть более современный анализ, когда сразу можно найти все формы гемоглобина – нормальный, окисленный и связанный с углекислотой. Он отличается высокой точностью, но такие приборы есть только в крупных диагностических центрах.
Что представляет собой гемометр Сали
Гемометр Сали
Гемометр Сали – это пробирка с запаянным отверстием. Она заполняется раствором солянокислого гематина, образующимся из гемоглобина и соляной кислоты.
Концентрация в стандартном растворе известна (167 г/л). При проведении анализа крови к сыворотке добавляют столько реактива, чтобы цвет образца и теста сравнялся. Потом измеряют соотношение объемов и вычисляют уровень гемоглобина. Такой метод считается устаревшим, он крайне редко используется в лабораторной практике. Достоверность анализа не превышает 70%.
Цианметгемоглобиновый метод определения гемоглобина в крови
Один из наиболее точных методов определения гемоглобина в крови – это цианметгемоглобиновый. Он заключается в добавлении к сыворотке крови раствора Добкина, содержащего железосинеродистый и цианистый калий, соду. Гемоглобин при этом переходит в метгемоглобин, а потом в цианметгемоглобин. Затем пробирка помещается в спектрофотометр и ее освещают светом. По непоглощенной части измеряют оптическую плотность и переводят показатель в уровень гемоглобина. Этот же принцип определения используется и при автоматических замерах при помощи портативного гемоглобинометра.
Клиническое значение гемоглобина
Клиническое значение гемоглобина состоит в переносе кислорода от легких крови, а при его снижении (анемии) этот процесс нарушается. При кислородном голодании в клетках уменьшается образование энергии. Это нарушает работу всех органов и систем, но сильнее всего страдает головной мозг и сердечная мышца.
Пациенты ощущают слабость, быструю утомляемость, одышку и сердцебиение при обычной физической активности. При тяжелой форме появляется головокружение, обморочные состояния, постоянная сонливость, ухудшение памяти, потеря работоспособности.
Анемия бывает при кровотечении, нарушении всасывания железа и витаминов, повышенном расходе при инфекции, хроническом воспалении. Реже причиной становится гемолиз (ускоренное разрушение) эритроцитов, недостаточное образование красных клеток в костном мозге.
Резкое уменьшение с потерей веса дает основание заподозрить опухоль. Возможно состояние, когда гемоглобин в норме, но из-за изменения структуры белок теряет способность переносить кислород. Это бывает при отравлении углекислым газом, окисью азота, наследственных болезнях, применении медикаментов.
Высокие показатели гемоглобина опасны повышенной густотой крови, тромбозом сосудов. Они указывают на хронические болезни легких, сердечную недостаточность, обезвоживание, непроходимость кишечника. Возможно и усиленное, бесконтрольное образование эритроцитов в костном мозге (полицитемия). Это заболевание относится к опухоли крови.
Гемихромный метод определения гемоглобина
Гемихромный метод для определения гемоглобина в крови считается более усовершенствованным, чем по Сали, так как в составе реактива нет цианидов. Суть этого способа заключается в образовании из всех гемоглобиновых фракций одной формы – гемихрома. Достоинствами методики считают:
- быстроту проведения,
- высокую точность,
- широкий диапазон измерений,
- устойчивость и безопасность реактивов.
Сколько составляет нормальная концентрация гемоглобина в крови
Самая высокая нормальная концентрация гемоглобина в крови у новорожденного, она составляет 135-210 г/л, а у недоношенных на 5-10 единиц ниже. Потом показатель постепенно снижается, к 7 годам он составляет 110-150 г/л. У здорового взрослого мужчины уровень находится в пределах 130-160 г/л.
Вне беременности у женщины должно быть 120-140 г/л белка эритроцитов, а при вынашивании ребенка нижняя граница на 10 единиц меньше. Интересной особенностью является уменьшение уровня гемоглобина в крови на 10-12% с 17 часов до 7 утра. Он немного меньше (на 5-7 единиц) после приема пищи. Показатель на 6% ниже, если кровь брать в положении лежа по сравнению с сидячим.
Определение количества гемоглобина проводится методом колориметрии и спектрофотометрии. Исследование нужно для выявления анемии или повышенных показателей. При подозрении на наличие окисленного белка метгемоглобина нужны особые способы проведения анализа.