Электрофорез гемоглобина что это
[13-165]
Электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатий
2900 руб.
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов): 2α и 2β, каждая из которых связана с гемом. Гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Посредством электрофореза гемоглобина можно проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.
Синонимы английские
Serum Hemoglobin Electrophoresis.
Метод исследования
Электрофорез и денситометрия.
Единицы измерения
Мг/дл (миллиграмм на децилитр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов) – 2α и 2β, – каждая из которых связана с гемом. HbA обеспечивает адекватный газообмен и тканевую оксигенацию. Фракция HbA2 – второстепенная форма гемоглобина, имеет формулу 2α2δ. Также у взрослого допустимо наличие следовых количеств фетального гемоглобина HbF (2α2γ), который является преобладающей фракцией в течение внутриутробного периода. В течение первых 6 месяцев жизни HbF замещается HbA.
Нарушения структуры гемоглобина обычно разделяют на две группы: гемоглобинопатии и талассемии, хотя талассемии являются формой гемоглобинопатии. Талассемии представляют собой нарушения синтеза α-, β- или обеих цепей гемоглобина. Также могут отмечаться нарушения синтеза δ-, γ- цепей. Большинство вариантов α- и β-талассемий сопровождается изменением уровня HbF и HbA2, поэтому определение этих изоформ может быть использовано для скрининга этих состояний.
Остальные гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Наиболее распространённые и клинически значимые аномальные варианты гемоглобина: S, D, E, C. Варианты HbS и HbD – патологические формы гемоглобина, которые обладают идентичной миграцией в щелочном геле и являются результатом точечных мутаций гена, кодирующего β-глобин. Варианты Е и С при данном методе мигрируют в составе фракции HbA2, при их наличии фракция HbA2 достигает более 25 %. Наибольшее клиническое значение представляет HbS-вариант, который приводит к серповидноклеточной анемии.
Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.
Электрофорез является чувствительным методом, с помощью которого можно исключить гемоглобинопатии либо определить тактику дальнейшего обследования для установления точного диагноза заболевания. Метод характеризуется высокой внутрипостановочной (SD
Метод исследования основан на электрофорезе гемоглобина, полученного при лизисе отмытых эритроцитов обследуемого. После разделения гемоглобина на фракции производится окрашивание зон миграции. Содержание гемоглобина в составе фракций измеряется с помощью цифровой денситометрии.
Когда назначается исследование?
- Скрининг гемоглобинопатий;
- наличие семейного анамнеза гемоглобинопатий, планирование семьи;
- микроцитарная анемия, не связанная с дефицитом железа;
- гемолитическая анемия неустановленной этиологии;
- обнаружение изменённых эритроцитов (серповидная деформация) при микроскопическом исследовании крови.
Что означают результаты?
Референсные значения
Гемоглобин A | ≥ 96,5% |
Гемоглобин A2 | |
Гемоглобин F | |
Гемоглобин S/D | 0 % |
Важные замечания
- Тест обладает высокой достоверностью при скрининге β-талассемий, вариантов, приводящих к серповидноклеточной анемии, и синдромов персистенции фетального гемоглобина.
- При использовании данного метода может быть затруднена индентификация α+-талассемии (талассемия с одной мутацией).
Также рекомендуется
02-029 Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
06-276 Гепсидин-25
06-017 Железо в сыворотке
Кто назначает исследование?
Гематолог, терапевт, врач общей практики.
Что такое тест на электрофорез в гемоглобине?
Тест на электрофорез в гемоглобине – это анализ крови, используемый для измерения и идентификации различных типов гемоглобина в вашем кровотоке. Гемоглобин – это белок внутри эритроцитов, ответственный за транспортировку кислорода в ваши ткани и органы.
Генетические мутации могут привести к тому, что ваше тело вырабатывает гемоглобин, который образуется некорректно. Этот аномальный гемоглобин может вызвать слишком мало кислорода для достижения ваших тканей и органов.
Существуют сотни различных типов гемоглобина. Они включают:
- Гемоглобин F : Это также известно как фетальный гемоглобин. Это тип, который встречается у растущих плодов и новорожденных. Он заменен гемоглобином вскоре после рождения.
- Гемоглобин A : Это также известно как взрослый гемоглобин. Это самый распространенный тип гемоглобина. Он встречается у здоровых детей и взрослых.
- Гемоглобин C, D, E, M и S : Это редкие типы аномального гемоглобина, вызванные генетическими мутациями.
рекламаРеклама
Диаграмма нормальных уровней
Нормальные уровни гемоглобина
Тест на электрофорез в гемоглобине не говорит вам о количестве гемоглобина в крови – это делается при полном анализе крови. Уровни, на которые ссылается тест на электрофорез в гемоглобине, – это проценты различных типов гемоглобина, которые могут быть найдены в вашей крови. Это различно у младенцев и взрослых:
У младенцев
Гемоглобин в основном состоит из гемоглобина F у плодов. Гемоглобин F по-прежнему составляет большинство гемоглобина у новорожденных.
| Возраст | Гемоглобин F% |
| новорожденный | от 60 до 80% |
| 1+ год | от 1 до 2% |
У взрослых
Нормальные уровни типов гемоглобина у взрослых:
| Тип гемоглобина | Процент |
| гемоглобин A | 95% до 98% |
| гемоглобин A2 | 2% до 3% |
| гемоглобин F | 1% до 2% |
| гемоглобин S | 0% |
| гемоглобин C | 0% |
Реклама
Цель
Почему гемоглобин электрофорез
Вы приобретаете различные аномальные типы гемоглобина, наследуя мутации генов на гены, ответственные за продуцирование гемоглобина. Ваш врач может рекомендовать тест на электрофорез в гемоглобине, чтобы определить, есть ли у вас расстройство, вызывающее появление аномального гемоглобина. Причины, по которым ваш врач может захотеть провести тест на электрофорез в гемоглобине, включают:
1. В рамках обычной проверки: Ваш врач может проверить ваш гемоглобин, чтобы пройти полный анализ крови во время обычного физического состояния.
2. Чтобы диагностировать расстройства крови: Возможно, у вашего врача есть тест на электрофорез в гемоглобине, если вы проявляете симптомы анемии.Тест поможет им найти любые ненормальные типы гемоглобина в крови. Это может быть признаком расстройств, включая:
- серповидноклеточная анемия
- талассемия
- полицитемия vera
3. Чтобы контролировать лечение: Если вас лечат от состояния, вызывающего ненормальные типы гемоглобина, ваш врач будет контролировать ваши уровни различных типов гемоглобина с помощью электрофореза на гемоглобине.
4. Для скрининга на генетические условия: Люди, у которых есть семейная история унаследованных анемий, таких как талассемия или серповидноклеточная анемия, могут выбрать для скрининга этих генетических заболеваний до рождения детей. Электрофорез гемоглобина будет указывать, имеются ли какие-либо ненормальные типы гемоглобина, вызванные генетическими нарушениями. Новорожденных также регулярно скринируют на эти генетические нарушения гемоглобина. Ваш врач может также захотеть проверить вашего ребенка, если у вас есть семейная история аномального гемоглобина или у них есть анемия, которая не вызвана дефицитом железа.
РекламаРеклам
Процедура
Где и как проводится тест на электрофорез в гемоглобине
Вам не нужно делать что-либо особенное для подготовки к электрофорезу гемоглобина.
Вам, как правило, нужно пойти в лабораторию, чтобы получить вашу кровь. В лаборатории поставщик медицинских услуг берет образец крови из руки или руки: сначала они очищают сайт мазкой спиртов. Затем они вставляют маленькую иглу с трубкой, прикрепленной для сбора крови. Когда набирается достаточное количество крови, они удаляют иглу и закрывают сайт марлевой подушкой. Затем они отправляют ваш образец крови в лабораторию для анализа.
В лаборатории процесс, называемый электрофорезом, пропускает электрический ток через гемоглобин в вашем образце крови. Это приводит к разложению различных типов гемоглобина в разные полосы. Затем ваш образец крови сравнивают со здоровым образцом, чтобы определить, какие типы гемоглобина присутствуют.
Реклама
Риски
Риски электрофореза гемоглобина
Как и при любом анализе крови, существуют минимальные риски. К ним относятся:
- кровоподтеки
- кровотечение
- инфекция на месте прокола
В редких случаях вены могут набухать после того, как кровь нарисована. Это состояние, известное как флебит, можно обрабатывать теплым компрессом несколько раз в день. Постоянное кровотечение может быть проблемой, если у вас расстройство кровотечения или вы принимаете кровоточащие лекарства, такие как варфарин (кумадин) или аспирин (буферин).
РекламаРеклама
Результаты и следующие шаги
Что ожидать после теста
Если ваши результаты показывают аномальные уровни гемоглобина, они могут быть вызваны:
- заболеванием гемоглобина С, генетическим расстройством, которое приводит к тяжелая анемия
- редкая гемоглобинопатия, группа генетических нарушений, вызывающих аномальное производство или структура красных кровяных телец
- анемия серповидно-клеточной анемии
- талассемия
Ваш врач будет проводить контрольные тесты, если тесты на электрофорез в гемоглобине показывают что у вас ненормальные типы гемоглобина.
Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала – методика, показатели нормы
Принцип метода одинаков с заложенным в основу электрофоретического отделения сывороточных белков. В данном электрическом поле частицы, несущие определенную электрическую зарядку, перемещаются более или менее в зависимости от силы электрического поля, электрической зарядки, величины и формы молекулы.
Что касается гемоглобина основным фактором электрофоретического отделения является электрическая зарядка, поскольку форма и величина молекулы одинаковы для различных видов гемоглобина.
Электрофорез гемоглобина практикуется во всех используемых вариантах в отношении белков, в том числе, электрофорез на бумаге, в агаровом геле, в геле и блоке крахмала, в геле полиакриламида, на уксуснокислом целлюлозе. Каждая из этих разновидностей представляет свое преимущество, которое следует учитывать при выборе соответствующего метода.
Необходимая аппаратура — электрический источник питания и бак (ванна) для буфера; используемые материалы в качестве миграционной питательной среды почти полностью соответствуют применяемым для электрофореза сывороточных белков.
Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала отличается рядом преимуществ, в силу которых ему отдается предпочтение при исследовании гемоглобинопатии. На этой питательной среде можно отделить почти все виды физиологического и патологического гемоглобина, даже когда он находится в малом концентрации. Не требует окраски. Промывание и количественная оценка осуществляются легко, используемый крахмал не требует специальной обработки, дешевый и побывается без затруднений.
Материалы для электрофореза гемоглобина в блоке крахмала: картофельный крахмал; аппарат для электрофореза, слагающийся из выпрямителя, бака для буфера и пластинки из плексигласса, на которую наносится крахмал; буфер веронал-мединал — 8,8 показатель водорода и 0,5 ионная мощность; веронал 1,84; мединал 10,8; лактат кальция 0,384; дистилированная вода до 1000 мл; 2% раствор цианистого натрия.
Методика электрофореза гемоглобина в блоке крахмала
В стекляную или эмалированную посуду насыпать 150—200г крахмала и залить 300—400 мл дистилированной воды. Помешать, после осаждения крахмала слить воду и налить буфер веронал-мединал; хорошо перемешать и оставить 30—40 минут, в случае надобности можно сохранить на ночь в холодильнике. После гомогенизации приготовленный таким образом крахмал наносится на пластинку плексигласса, при этом слой его должен иметь 5 мм толщины.
Поскольку по краям пластинки имеется ободочек соответствующей толщины, крахмал не стекает с пластинки. Слой оседаемого крахмала однородный. Лишнее количество буфера удалить фильтровальной бумагой.
На одну пластинку крахмала можно нанести одновременно несколько проб для миграции, причем их число зависит от величины пластинки. Наносить их (по 2—3 капли) на расстоянии 4—5 см от края пластинки, между образцами оставлять расстояние 3—4 см.
До начала миграции гемолизаты обработать цианистым натрием в целях преобразования гемоглобина в цианметгемоглобин — весьма устойчивый вид. На 5—6 капель раствора гемоглобина добавить каплю 2% раствора цианистого натрия.
Пластинку спустить в бак, при этом пятна направляются в сторону отрицательных электродов; связь с буферным раствором наладить с помощью фильтровальной бумаги. Миграция происходит при напряжении 200 вольт, ампераж в зависимости от размеров пластинки с крахмалом и толщины слоя последнего. Время миграции 18—20 часов.
В описанных условиях проба гемоглобина от человека в норме мигрирует от отрицательного к положительному полюсу и делится на две фракции: основную (97—98%) на первом плане, представляющую собой гемоглобин А1, а позади, на расстоянии 3—4 см, вторую (2—3%), составляющую гемоглобин А2.
При таких условиях из крови пуповины также отделяются две фракции: одна из них составляет 30—40% — гемоглобин А1, вторая — гемоглобин Ф, расположенная между гемоглобином А1 и гемоглобином А2, на очень близком расстоянии от первого.
Количественное определение отделенных, путем электрофореза, фракций осуществляется промыванием а затем фотометрированием.
Отделенные пятна вырезать и каждый из них вложить в пробирку. В другой пробирке промыть участок чистого крахмала, соответствующего по величине площади, занимаемой гемоглобином А2, в качестве контрольного препарата для фотометрирования.
В каждую пробирку влить одинаковое количество буфера. Взболтать, гемоглобин переходит в раствор, в то время как крахмал оседает на дно пробирки. После оседания надосадочную массу профильтровать, процентрифугировать и прочитать результат с помощью фотометра или спектрофотометра с фильтром, соответствующим длине волны 540 нм. Значение данной фракции в процентном отношении выводится из суммы экстинкий, составляющей 100% экстинкций каждой фракции, деленной на общую экстинкцию.
Нормальные физиологические значения гемоглобина, полученные в подобных условиях, составляют 2—3% гемоглобина А2 и 97—98% гемоглобина А1.
Если подвергнуть электрофорезу раствор гемоглобина из крови больного с аномальным гемоглобином, то последняя, в зависимости от имеющейся в ней электрической зарядки, мигрирует медленнее или быстрее нормального гемоглобина, тем самым способствуя ее отделению и количественному определению.
Вливаемый в ванну буфер можно исплоьзовать несколько раз, при условии изменения направления тока после каждой миграции.
– Также рекомендуем “Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормы”
Оглавление темы “Лабораторная диагностика в гематологии”:
- Техника пункции костного мозга – получения материала для миелограммы
- Исследование костного мозга – миелограмма
- Исследования обмена железа радиоактивным железом Fe59
- Методика определения объема крови и массы эритроцитов
- Исследование продолжительности жизни эритроцитов – норма
- Исследование продолжительности жизни тромбоцитов – норма
- Отбор, приготовление и хранение проб крови при гемоглобинопатиях
- Электрофорез гемоглобина в блоке крахмала – методика, показатели нормы
- Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормы
- Определение щелочноустойчивого гемоглобина – методика
Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе – методика, показатели нормыЭлектрофорез на уксуснокислой целлюлозе составляет быстрый и чувствительный метод. Отделяет как физиологические, так и патологические фракции, даже если они находятся в очень малой концентрации. Материал для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе: буфер трис-ЭДТА-борная кислота [трис (гидроксиметиламинометан) 14,50; 1,50 г ЭДТА (келатон 2); 0,90 г. борной кислоты; до 1000 мл дистилированной воды; 2% раствор цианида натрия; ленты уксуснокислой целлюлозы (сепрафор III, целаграмм, целлогель и пр.)]. Методы для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозеЛенты ацетата погрузить в буфер, затем протампонировать между двумя кусками фильтровальной бумаги и растянуть на опорную пластинку аппарата для электрофореза. Рама погружается в ванну для электрофореза. Для лучшего соединения с буфером на края лент ацетата наложить полоску фильтровальной бумаги Ватмана. Спустя 10 минут после погружения в ванну с помощью капиллярной трубки нанести на отрицательный полюс каждой ленты образец гемоглобина, в виде очень узенькой полоски. Когда ленты широкие, можно нанести несколько образцов. Гемоглобин наносится в виде цианметгемоглобина (5—6 капель раствора гемоглобина на 1 каплю цианида). Подвергнуть двухчасовой миграции, при напряжении 200 в и ампераже 0,5 ма/см.
При таких условиях работы возможно отделить нормальные фракции гемоглобин — А1 и А2, равно как и все патологические фракции гемоглобина, иной электрической зарядки, чем нормальный гемоглобин. Элюцию фракций проводить, без окраски, в буфере трис. Что касается гемоглобина А2 и контрольного препарата элюцию делать в 3 мл буфера, в то время как для гемоглобина А1 использовать 15 мл буфера. В отношение патологи-гических фракций объем вещества для элюции определить в зависимости от количества аномального гемоглобина. Через 30 мин. после элюции, прочитать результат, с помощью Спеколя или спектрофотометра, при длине волны 415 нм. При расчете учитывать объемы, использованные для элюции, в том смысле что полученный, в отношение гемоглобина А1 результат следует помножить на 5. Сумма экстинкций, составляющая 100%, экстинкция каждой фракции деленная на общую экстинкцию, дает, в процентном отношении, значение соответствующей фракции. По этому методу нормальные значения для гемоглобина А2 колеблятся между 1,5—2,5%. Если по какой-либо частной причине ленты следует окрасить то, после промывания, на лентах помимо нормальной и патологических фракций появляются две белковые негемоглобинные фракции, располагающиеся позади гамоглобина А2, представляющие собой угольные ангидразы b и c. – Также рекомендуем “Определение щелочноустойчивого гемоглобина – методика” Оглавление темы “Лабораторная диагностика в гематологии”:
|
