Методы измерения гемоглобина крови

Методы определения содержания гемоглобина в крови разнятся между собой. Их особенности зависят от реактива, который используется в лабораториях, безопасности исследования, его точности и скорости. По результатам анализов проходит диагностика.

Клиническое значение определения гемоглобина

Гемоглобин образуется в эритроцитах. Делая вдох, кровяные тельца насыщаются кислородом. Через них белок по крови “доставляет” кислород в ткани, а затем, возвращаясь, углекислый газ попадает в легкие. Именно Hb в какой-то мере отвечает за такую важную функцию, как дыхание.

У взрослого человека значения гемоглобина зависят от пола. У женщин концентрация клеток ниже, так как их мышечная масса обычно меньше:

• 12-16 г/% или 120-160 г/л для мужчин;
• 11-14г/% или 110-140 г/л для женщин.

Эти показатели являются нормой. Их изменения в большую или меньшую сторон говорит о заболевании. Во время беременности или в пожилом возрасте показатели могут снижаться. Если понижение не связано с этими факторами, врачи часто диагностируют:

• железодефицитная, серповидно-клеточная анемия, которая приводит к уменьшению эритроцитов;
• недостаток фолиевой кислоты или витамина В12;
• болезни красного костного мозга.

Повышение гемоглобина тоже ведет за собой плохие последствия. Часто симптом связан с рядом проблем:

• злокачественные новообразования, болезни красного костного мозга;
• увеличение числа эритроцитов в связи с сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
• уменьшение плазмы крови.

Гемоглобин образуется в эритроцитах после того, как пропадает ядро или приобретения клетки зрелости. Селезенка утилизирует красные кровяные тельца и Hb. 1 клетка живет 4 месяца. После того, как она погибает, в крови образуется железо. Оно попадает в красный костный мозг. С его помощью появляются новые красные кровяные клетки.

Методы измерения гемоглобина в крови

Определение концентрации гемоглобина возможно с помощью нескольких методов. Hb измеряют еще и в моче, так как в мочевыводительной системе бывают кровотечения (как незначительные, так и обильные).

Различают несколько основных форм гемоглобина:

• оксигемоглобин;
• карбоксигемоглобин;
• дезоксигемоглобин.

Для анализа все формы Hb с помощью реактивов делают одинаковыми, чтобы их мог считать прибор. После применения определенной методики, используют полуавтоматический анализатор. С его помощью измеряют спектр длины волны молекулы гемоглобина.

Ручной подсчет применяется с реактивом и биолоатериала. Такой способ не считает количество клеток, а определяет их присутствие в жидкости. Часто используют для анализа мочи.

Унифицированные методы определения гемоглобина

Исследование является точный, быстрым и используется в большинстве лабораторий. Для Hb подходит гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Метод основывается на определении точного числа клеток при помощи подсчета длины волны молекулы на специальном полуавтоматическом приборе.

Другой способ – гимехромный. Проводится также, однако для него используются более качественные реактивы, которые не вредят здоровью исследователя. Метод является более щадящим и применяется чаще первого.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

Определить длину Hb сложно, так как он имеет много разных форм. Для упрощения процесса и более точных результатов его превращают в метгемоблогин. Делается это с помощью специальных химических веществ.

Чтобы правильно провести анализ необходим трансформирующий раствор, измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Длина волны гемоглобина составляет 540 м. В таком пределе аппарат определяет нужный показатель. Полученный результат высчитывается по формуле и переводится в значение граммы на литры.

Этот метод одобрен Комитетом здравоохранения из-за того, что он является максимально точным. Он имеет много положительных сторон:

• дешевизна реактивов, которая не требует от медицинского учреждения большого бюджета;
• простата в проведении: даже студент-лаборант сможет провести процедуру;
• скорость анализа;
• использование полуавтоматического анализатора, что исключает врачебную ошибку в подсчетах.

Несмотря на все плюсы, методику считают устарелой. У нее есть ряд серьезных недостатков:

• используемые вещества опасны для здоровья врача: при неправильной эксплуатации возможны поражение слизистых, кожи, дыхательных путей;
• наличие современных и полностью безопасных методов работы;
• врачебная ошибка возможна на этапе выбора дозировки реактивов.

Гемиглобинцианидный способ исследования -точный анализ, который применялся раннее в каждом лаборатории. Сейчас же на смену ему пришли более современные методы.

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

Здесь клетки Hb переводят в форму гемихрома (HbChr). Его легко удается подсчитать. По полученному числу врачи определяют концентрацию гемоглобина в биоматериале. Методика имеет множество плюсов:

• 2 варианта забора материала: капилярная крови или венозная;
• скорость исследования. Результаты будут готовы в день сдачи;
• безопасность для сотрудников, так как при анализе не используются опасные для здоровья вещества;
• полуавтоматический анализатор, который используют для подсчета количества клеток. Исключает врачебную ошибку;
• простота метода и цена используемых реактивов;
• высокая точность показателей, на основе которых врач делает выводы о состоянии пациента;
• использование небольшого количества крови. Если результаты показались сомнительными, анализ всегда можно сделать повторно.

Исследование полностью безопасно, но и у него есть ряд минусов. Делая выводы по поводу диагноза, специалист всегда должен помнить о недостатках методики:

• ошибки при сборе крови;
• неправильная концентрация реактивов или их неверное подготовление;
• размер клеток и их форму рассмотреть невозможно, так как фотометр лишь подсчитывает их количество.

Гемихромный метод используется врачами довольно часто для постановки диагноза больному. Он точен, безопасен и не затратен для больницы, поэтому очень популярен при анализе крови.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

В капиллярную или венозную крови добавляется трансформирующий раствор. С его помощью образуется метгемоглобин.

В пробирке смешивают 5 мл реагента и 20 мл биоматериала. В течение 10 минут происходит реакция. Жидкость выливают в специальный сосуд, через который фотоэлектроколориметр пропускает лучи. Он подсчитывает количество элементов, длина которых составляет 543 нм. Содержание гемоглобина высчитывается далее по формуле.

Метод сали для определения гемоглобина в крови

Анализ основывается на визуальном определении содержания гемоглобина, то есть на колориметрии. Это делают при сравнении окраски исследуемого материала с раствором солянокислого гематина.

В кровь человека добавляют хлористоводородную кислоту. Благодаря этому Hb переходит в форму солянокислого гематина. В раствор далее наливают дистиллированную воду (до тех пор, пока цвет не будет таким же коричневым, как в контрольной пробирке). Для сравнения используют специальный колориметрический аппарат.

Снизу пробирки будет цифра, которая показывает содержание показателя в 100г крови. Чтобы выделить количество клеток в литре, результат умножают на 10. Далее врач рассчитывает результаты по формуле.

Метод имеет погрешность в 30%, что делает его недостаточно точным для постановки диагноза больному. Из-за этого лаборанты применяют его в работе редко.

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Использование спектофотометра гарантирует максимальную точность результатов исследования. Для выявления гемоглобина, необходимо перевести клетки в единую форму, так как прибор может улавливать только одну из его форм. Для этой цели берут различные реактивы.

Нужные элементы окрашивают (в красный или зеленый цвет), потом аппарат в выбранном диапазоне вылавливает длину волны клеток и подсчитывает их.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Проведение исследования проходит по тому же принципу, что и в других методах. Главное отличие состоит в использовании аммиака в концентрации 0,04.

Сначала проба настаивается какое-то время, чтобы гемоглобин перешел в одну форму. Далее ее подсчитывает прибор – полуавтоматический анализатор спектрофометр. Раствор переливают в пробирку под лучи аппарата. Он выделяет волны длинною в 543 нанометров.

Цианметгемоглобиновый метод

Еще один анализ, который считается наиболее точным. Он основывается на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин после добавления в биологической жидкости химическое вещество.

Реактивом выступает раствор Драбкина. Соотношение биоматериала и реагента: 2:500. Через полчаса от начала процедуры замеряют клетки длиной в 550 нм, а также уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

Полученные растворы сравнивают по цвету при помощи колометрии. По итогу лаборанты рисуют таблицы и узнают о количестве железосодержащего пептидного соединения в кровотоке.

Исследование мочи

Мочу возможно обследовать 4 способами. Биоматериал используют только свежий. Гемоглобин в настоявшейся урине превращается в метгемоглобин и реакция не получится.

Для проведения исследования возможно несколько вариантов. Выбирают его в зависимости от условий проведений исследования:

• гваяковая кислота. Щепотку вещества разводят и добавляют 3 мл этанола 96%. 8-10 капель раствора наливают в такому же количеству мочи. При наличии там Hb, жидкость окрасится в синий цвет;
• амидопирин. В 2-3 мл урины добавляют 10 капель амидопирина и столько же перекиси водорода 3%. Раствор станет фиолетовым, если в нем есть гемоглобин;
• бензидит. В емкости смешивают 6 капель бензидита и перекиси водорода 3% с 4 каплями мочи. При положительном результате раствор станет зеленым;
• тест-полоски, таблетки. Подходит для домашнего самостоятельного анализа. В них уже содержится специальный раствор реактивов. Полоску опускают в небольшое количество мочи, происходит реакция. По цвету определяются результаты. Таблетки просто растворяются в биоматериале. Индикаторная шкала всегда прописана на самой упаковке, поэтому с определением показателей справится любой человек.

Определения гемоглобина в моче наиболее целесообразно для быстрого домашнего обследования. Другие методы используются и в лабораториях.

Профилактика

Повышение или понижения уровня гемоглобина означает проблемы со здоровьем и различные серьезные заболевания. Чтобы избежать этого, придерживайтесь ряда правил:

• своевременная сдача крови. Хотя бы раз в год необходимо проводить плановый анализ, который поможет следить за уровнем Hb;
• отказ от курения. Табачный дым, который вдыхает человек, связывает гемоглобин с угарным газом, что снижает способность белка доставлять кислород в клетки организма;
• полноценное питание. Проблемы с гемоглобином могут возникнуть из-за строгих диет. Продукты, богатые белком (мясо, рыба, яйца, творог, сыр) способствуют профилактике анемии. Рекомендуется увеличить потребление продуктов, богатых железом – овсянки, пшена, гречневой каши;
• при болезнях ЖКТ внимательно следите за здоровьем, так как в периоды обострения возможны кровотечения. Это снижает уровень Hb в крови.

От гемоглобина во многом зависит общее состояние человека. Анализ на определения его уровня – один из главных и плановых ежегодных исследований, так как белок отвечает за важную функцию – поставку кислорода в клетки организма. Hb включен в процесс дыхания и доставки углекислого газа и в легкие, с помощью которого мы живем. Поэтому необходимо следить за показателями и сверять их с цифрами нормы для вашего пола и возраста.