Норма ретикулоцитов крови у собак
Определение количества ретикулоцитов используется при наличии анемии. Скорость высвобождения ретикулоцитов из костного мозга является лучшим показателем функции эритроидного компонента костного мозга.
- Подготовка пациента
- Показания и противопоказания
- Интерпретация и форма выдачи результата
Ретикулоциты – незрелые безъядерные эритроциты млекопитающих, которые содержат остаточные РНК и митохондрии, агрегированные в форме гранулярной сетчатой структуры (ретикулума) и выявляемые при использовании метода суправитального окрашивания метиленовым синим (окраска живых клеток). При созревании эритроцитов эта ретикулярная сеть исчезает. Высвобождение ретикулоцитов из костного мозга происходит в ответ на анемию. В зависимости от содержания остаточного количества рибосом и, соответственно, зрелости клеток выделяют два вида ретикулоцитов: агрегатные и зернистые (пунктатные). Агрегатные ретикулоциты циркулируют в крови в течение короткого промежутка времени (около 12 часов), прежде чем превратятся в зернистые (пунктатные) ретикулоциты, которые затем (через 10 дней) преобразовываются в зрелые эритроциты. Количество зернистых (пунктатных) и агрегатных ретикулоцитов возрастает с увеличением интенсивности эритропоэза. Поскольку зернистые ретикулоциты циркулируют в течение нескольких недель и сохраняются после того, как уровень агрегатных ретикулоцитов вернется в пределы референсных значений, их подсчет не имеет большого клинического значения при оценке текущего регенераторного ответа. Присутствие зернистых ретикулоцитов указывает на реакцию костного мозга на анемию, имевшую место примерно три недели назад.
При исследовании ретикулоцитов определяется процент ретикулоцитов путем пересчета на 1000 зрелых эритроцитов. При использовании этого показателя возможна некорректная оценка ответа костного мозга, потому как:
- Ретикулоциты, высвобождаемые из костного мозга в кровь у животных при анемии, смешиваются с меньшим количеством зрелых эритроцитов. Таким образом, в результате происходит завышение процента ретикулоцитов.
- Менее зрелые формы ретикулоцитов выходят в кровяное русло в ответ на анемию раньше (сдвиг ретикулоцитов). Эти ретикулоциты дольше сохраняются в крови потому, что им требуется больше времени для созревания, что приводит к завышению процента ретикулоцитов.
Скорректированный процент ретикулоцитов. При его расчете учитывается величина гематокрита. Вносимая корректировка актуальна только в случае, указанном в пункте 1, но не в случае, указанном в пункте 2. Скорректированный процент ретикулоцитов больше чем 1% у собак и 0,4% у кошек указывает на стимуляцию костного мозга в ответ на анемическое состояние. Скорректированный процент ретикулоцитов не был подтвержден для использования у других видов животных.
Абсолютное число ретикулоцитов. Этот параметр вносит коррективы в случае, описанном в пункте 1 (выше), но не корректирует эффект, описанный в пункте 2. Получение абсолютного числа ретикулоцитов больше чем 80х109/л у собак и более 60х109/л у кошек указывает на регенеративный ответ (регенераторную анемию), и что причиной анемии являются внешние воздействия на костный мозг (т. е. кровотечение или гемолиз). В зависимости от снижения гематокрита или при очень низком гематокрите должно иметь место пропорционально более высокое абсолютное число ретикулоцитов.
Ретикулоцитарный индекс. Этот поправочный коэффициент используется для человека, но также был применен у собак и кошек для корректировки пунктов 1 и 2 (см. выше). Значимость этого параметра остается спорной, поскольку отсутствуют данные, подтверждающие успешное его использование у животных.
В крови здоровых собак может содержаться небольшое количество ретикулоцитов (до 1%). У собак все ретикулоциты агрегатные, т. е. они больше, чем зрелые эритроциты, и содержат большие глыбки агрегированных рибосом. Ретикулоцитоз у кошек менее выражен, чем у собак. У кошек выделяют две формы ретикулоцитов: зернистые (пунктатные) и агрегатные. Зернистые ретикулоциты более зрелые, чем агрегатные, и близки по размерам к созревшим эритроцитам. Они содержат от двух до шести мелких включений гранулярно-нитчатой субстанции остаточной РНК. У здоровых кошек может насчитываться до 10% зернистых (пунктатных) ретикулоцитов. После эпизода разрушения эритроцитов, возрастание числа зернистых (пунктатных) ретикулоцитов происходит через одну неделю, пик роста приходится на 2-3 неделю, затем их число постепенно снижается. Таким образом, увеличение зернистых (пунктатных) ретикулоцитов указывает на стимуляцию регенераторного ответа, произошедшую за 2-4 недели до этого, в то время как увеличение агрегатных ретикулоцитов указывает на недавнюю стимуляцию костного мозга. Увеличение числа агрегатных ретикулоцитов свидетельствует о текущей активности костного мозга в ответ на анемию (т. е. увеличение интенсивности эритропоэза или регенерации). Определение количества агрегатных ретикулоцитов является наиболее полезным при оценке реакции костного мозга при анемии, при этом зернистые (пунктатные) ретикулоциты обычно не подсчитываются (они считаются зрелыми клетками). Тем не менее, при легкой степени анемии подсчет пунктатных ретикулоцитов является полезным, поскольку обычно происходит сохранение агрегированных ретикулоцитов в костном мозге до их созревания в зернистые (пунктатные).
Отсутствие ретикулоцитов после развития анемии позволяет предположить отсутствие адекватной реакции костного мозга (нерегенеративную анемию). Это может наблюдаться при нехватке времени для развития ретикулоцитоза, недостаточности ретикулоцитарного ответа или нарушении эритропоэза.
Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов).
Исследуемый аналит: цельная кровь.
Метод исследования: микроскопия мазка (суправитальный метод окраски ретикулоцитов ).
Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.
Показания:
- установить, что является причиной появления изменений: снижение образования эритроцитов или повышенное разрушение или потеря эритроцитов.
- Оценить ответ эритроидного ростка костного мозга (т.е. подтвердить наличие или отсутствие регенераторного ответа на анемию).
Противопоказания: неизвестны.
Метод отбора биоматериала: венепункция.
Преаналитика: взятие крови — пробирка с розовой крышкой (с ЭДТА) 0,5 мл; для крупных собак можно использовать пробирку с сиреневой крышкой (с ЭДТА) 2 мл. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом. Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8°С. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).
Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.
В крови здорового животного ретикулоциты отсутствуют или присутствуют в незначительном количестве менее 1,5%. До 48 часов после острого кровотечения или гемолиза увеличение числа ретикулоцитов бывает не столь заметным, максимальное увеличение наблюдается на 4-7-ой день. Развитие ретикулоцитоза может быть отсрочено у животных с различными системными заболеваниями и у пожилых животных. При регенеративной анемии в условиях адекватного функционирования костного мозга величина ретикулоцитарного ответа должна соответствовать степени тяжести анемии (чем тяжелее анемия и ниже гематокрит, тем сильнее ретикулоцитарный ответ). Гемолитические анемии обычно приводят к более заметному ретикулоцитозу, чем постгеморрагические анемии. Железо из разрушенных эритроцитов более легкодоступно для эритропоэза, чем железо, которое хранится в виде гемосидерина.
Количество ретикулоцитов должно интерпретироваться с учетом степени анемии. Предпочтительнее пользоваться показателем абсолютного числа ретикулоцитов (АЧР), чем процентом ретикулоцитов, так как на показатель АЧР не влияют изменения общего количества эритроцитов. У животных при легкой и тяжелой степени анемии в крови циркулирует одинаковое абсолютное число ретикулоцитов, но процент ретикулоцитов выше при тяжелой анемии, поскольку в крови меньше зрелых клеток. Это может дать ложное впечатление о том, что тяжелая анемия имеет более регенеративный характер, чем умеренная анемия. В качестве альтернативы можно использовать показатель скорректированного процента ретикулоцитов. Иногда для собак используют расчетный ретикулоцитарный индекс. С увеличением тяжести анемии ретикулоциты проводят меньше времени в костном мозге, выходят менее созревшими и дольше находятся в крови до созревания в эритроциты. Это означает, что скорректированный процент ретикулоцитов и абсолютное количество ретикулоцитов могут переоценивать степень активности эритропоэза в костном мозге. Однако ретикулоцитарный индекс не является достоверным у собак и кошек, поскольку в формуле для его расчета используются данные о времени созревания эритроцитов человека, а для животных такие временные характеристики пока неизвестны. Поэтому для животных этот показатель редко рассчитывается с предпочтением подсчета абсолютного количества ретикулоцитов.
Единицы измерения: Абсолютное число ретикулоцитов – клеток /мкл.
Референсные значения:
- 60000-80000-физиологическая
- регенерация(угнетение у пациента с
анемией) - 80000-150000-легкая регенерация
- 150000-300000-умеренная регенерация
- 300000-500000-выраженная регенерация
- >500000-значительно выраженная.
Повышение показателя при анемии (регенеративная анемия):
- Острая потеря крови.
- Гемолиз.
- Токсическое действие цинка или меди.
- Фрагментация эритроцитов (ДВС-синдром, неоплазия, инвазии кровепаразитов).
- Действие змеиного яда.
Понижение показателя при анемии (нерегенеративная анемия):
- Острая кровопотеря или гемолиз (длительностью менее 1-2 дней), когда костный мозг еще не успел отреагировать.
- Анемия хронических заболеваний.
- Недостаточный синтез эритропоэтина (хроническая болезнь почек).
- Эндокринопатии (в том числе гипотиреоз).
- Дефицит железа (как правило, вторичный по отношению к хроническому наружному кровотечению и обычно выявляемым микроцитозом).
- Заболевания костного мозга (снижение способности синтеза).
- Инфекционные заболевания (парвовироз, эрлихиоз и др.).
- Миелофтиз.
- Токсическое повреждение костного мозга.
- Истинная эритроцитарная аплазия.
- Миелопролиферативные или миелодиспластические заболевания.
- Дефицит питательных веществ (редко).
Радюк Екатерина Васильевна – врач-лаборант диагностического отдела ИВЦ МВА
По мере того, как предшественники эритроцитов созревают в костном мозге, они отторгают свои ядра и избавляются от органелл (рибосом и митохондрий), участвующих в клеточном метаболизме и синтезе гемоглобина. Ретикулоциты – это незрелые эритроциты, еще содержащие в цитоплазме рибосомы, но уже лишенные ядер. По сравнению со зрелым эритроцитом они содержат на 20-30% меньше гемоглобина. В мазке, окрашенным стандартным красителем, они выглядят как более крупные и темные эритроциты, поэтому называются также полихроматофильными эритроцитами, или полихроматофилами (рис.1)
Рис.1. Картина регенераторной анемии. Стрелками отмечены ядросодержащие эритроциты; крупные голубые безъядерные клетки – ретикулоциты (полихроматофильные эритроциты).
После выхода из костного мозга ретикулоциты дозревают в периферической крови. Самые молодые ретикулоциты, появляющиеся в периферической крови, называются агрегированными (или агрегатными) ретикулоцитами. Они содержат крупные глыбки преципитированных рибосом (рис. 2).
Рис.2. 3 Агрегатных ретикулоцита (окраска на ретикулоциты)
По мере созревания агрегатные ретикулоциты постепенно превращаются в зернистые (или пунктатные). Зернистые ретикулоциты содержат мелкие точечные агрегаты рибосом (рис. 3).
Рис.3. Стрелкой отмечен зернистый ретикулоцит (окраска на ретикулоциты). Крупные синие точки в других эритроцитах – тельца Хайнца (но это уже совсем другая история).
У собак и кошек есть свои видовые особенности. Ретикулоциты собак созревают быстро (в течение 24 часов). Зернистые ретикулоциты собак являются коротко живущими и обычно не встречаются в значимых количествах. Поэтому при оценке регенераторного ответа у собак учитываются только агрегированные ретикулоциты.
У кошек агрегированные ретикулоциты примерно за 12 часов созревают до зернистых. Зернистые же ретикулоциты могут циркулировать 10-12 суток до своего превращения в эритроциты. Поэтому зернистые ретикулоциты у кошек встречаются в норме в значительных количествах (до 10% от всех эритроцитов); в мазках, окрашенных стандартным красителем, они неотличимы от обычных эритроцитов.
Повышенное количество агрегированных ретикулоцитов и у собак, и у кошек подтверждает недавний регенераторный ответ на анемию. При этом следует помнить, что для того, чтобы костный мозг ответил на анемию, необходимо 3-4 дня, а своего максимума регенераторный ответ достигает через 7 дней. Повышенное количество зернистых ретикулоцитов у кошек указывает на ответ костного мозга, произошедший 3-4 недели назад.
Для подсчёта ретикулоцитов используют как автоматический, так и ручной методы. Однако следует помнить, что гематологические анализаторы, способные подсчитывать ретикулоциты (ProCyte, LaserCyte), учитывают только число агрегированных ретикулоцитов. Подсчет зернистых ретикулоцитов возможен на данный момент только с помощью микроскопии.
Оценка регенераторного ответа
Для оценки регенераторного ответа основываются на проценте ретикулоцитов от общего числа эритроцитов, а также на абсолютном количестве ретикулоцитов в литре или микролитре. Интерпретация самого по себе процента ретикулоцитов (без оценки абсолютного количества) не рекомендуется, так как он не учитывает степени анемии у пациента и будет повышаться при снижении количества зрелых эритроцитов. Нормы обычно устанавливает лаборатория, проводящая данное исследование. Любое повышение числа ретикулоцитов сверх референсного интервала позволяет сделать вывод о регенеративном ответе на анемию. Отсутствие повышения говорит либо об отсутствии регенераторного ответа костного мозга (т.е. о нерегенеративном типе анемии), либо о кровопотере, случившейся 1-2 дня назад (в таком случае костный мозг еще не успел ответить и следует повторить исследование через 5-7 дней).
При подготовке статьи использованы материалы книги «Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям у собак и кошек» (Ш.Ваден и др.), а также материалы «Практического курса гематологии собак и кошек для ветеринарных врачей».
Вернуться к списку
Глебова Ольга Анатольевна
врач-лаборант
Ретикулоциты (от лат. reticulum — сеточка) — это незрелые эритроциты, имеющие РНК-содержащие структуры, которые выявляются в виде синих гранул при специальной (суправитальной) окраске.
Зачем проводят анализ на ретикулоциты?
- Для определения эффективности эритропоэза (процесса образования эритроцитов) в костном мозге. Чаще всего вопрос о проведении анализа на ретикулоциты встаёт, когда у животного выявляют непроходящую анемию. Анемия (греч. «малокровие») — это состояние, характеризующееся снижением концентрации гемоглобина и, в большинстве случаев, количества эритроцитов и гематокрита в единице объёма крови. Определение анемии, как регенераторной или нерегенераторной, важно для дальнейшей диагностики основного заболевания, а также для прогноза течения болезни. В этом случае врачу могут помочь два анализа: биопсия костного мозга (высокоинформативный, но трудоёмкий и дорогой метод) и анализ на ретикулоциты. Дело в том, что в крови здорового животного количество ретикулоцитов крайне мало, а при анемии, например, связанной с кровопотерей или гемолизом, здоровый костный мозг начинает выделять их в увеличенном количестве. Это нормальная реакция, направленная на то, чтобы компенсировать потерю эритроцитарной массы, и в этом случае анемия становится регенераторной. Ретикулоциты выходят в кровь и там дозревают до эритроцитов, при этом, чем моложе ретикулоцит, тем больше времени ему требуется для созревания и тем дольше он определяется в крови. В отличие от людей, у которых в зависимости от возраста клеток выделяют пять групп ретикулоцитов, у кошек определяют две (агрегатные — более молодые, и пунктатные — более зрелые), а у собак всего одну группу (агрегатные). Нерегенераторная анемия может быть связана с первичными заболеваниями костного мозга, в том числе онкологического характера, с инфекциями или являться вторичной, например, при гипотиреозе.
- Также анализ на ретикулоциты можно проводить для оценки эффективности лечения анемий, связанных с дефицитом железа.
Когда проводят анализ?
Анализ следует проводить не раньше, чем через 3–5 дней после начала анемии. Это время, необходимое костному мозгу для развития ответа. Поэтому анализ, взятый непосредственно после острой кровопотери, может ложно натолкнуть на мысль о неэффективности эритропоэза. Вместе с тем обнаружение повышенного числа ретикулоцитов в крови животного с нормальным количеством эритроцитов может говорить о хронической потере крови.
Какой материал необходим для исследования?
Для подсчёта ретикулоцитов нужна цельная кровь. При этом материал можно взять из пробирки, в которую была собрана кровь для общего клинического анализа.
Как осуществляют подсчёт ретикулоцитов?
У собак определяют агрегатные ретикулоциты, у кошек — агрегатные и пунктатные. При этом необходима корректировка в соответствии со степенью и продолжительностью анемии. Также полезным является определение абсолютного числа ретикулоцитов, а для собак — ретикулоцитарного индекса.
Ретикулоцитарный индекс является более последовательным показателем, чем определение процентного числа ретикулоцитов, так как учитывает время пребывания этих клеток в крови. Если тяжесть анемии продолжает нарастать, в кровь выделяются более молодые ретикулоциты и время их циркуляции в крови увеличивается. В этом случае процентное содержание будет возрастать, но не за счёт усиления эритропоэза, и нерегенераторную (или гипорегенераторную) анемию можно ложно принять за регенераторный процесс.
При интерпретации результата надо иметь в виду, что слабая анемия может не так активно стимулировать костный мозг, и в кровь будут сразу выделяться зрелые эритроциты.
Существует ли видовая и возрастная специфика?
Да. У собак ретикулоцитарный ответ сильнее, чем у кошек, а значит, и нормализация гематокрита тоже происходит быстрее. Гематокрит — это показатель, отражающий процентное содержание эритроцитов в крови, и удобный для оценки степени анемии.
У лошадей ретикулоциты не определяют вовсе, так как у этих животных данные клетки редко поступают в кровь, даже если в костном мозге есть реакция, и эритропоэз повышен. Поэтому у лошадей проводят пункцию костного мозга. У других животных её можно избежать, используя несложный и не требующий седации анализ на ретикулоциты.
Кроме того, в период прекращения кормления материнским молоком у котят часто бывает субклинический дефицит железа, который ограничивает эритропоэз. Поэтому молодое животное будет менее интенсивно реагировать на кровопотерю, чем взрослые, и у них нельзя ожидать столь значительного повышения числа ретикулоцитов в ответ на анемию.